1959: LA NASCITA DELLA CITOGENETICA CLINICA

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1 «Rivista di Storia della Medicina», Anno XXI NS (XLII) fasc. 1-2 gennaio-dicembre 2011 ELENA FERIOLI, GIUSEPPE ARMOCIDA 1959: LA NASCITA DELLA CITOGENETICA CLINICA Nel ripercorrere brevemente le principali tappe della storia della citogenetica 1,eÁ necessario tenere presenti due aspetti importanti: il contesto scientifico e storico nel quale la citogenetica si eá sviluppata e come la sua evoluzione sia dipesa fortemente dal progresso delle tecniche utilizzate. I citogenetisti ritengono che lo sviluppo della loro disciplina sia avvenuto attraverso una ``etaá oscura'' 2, un periodo detto ``ipotonico'' 3, un altro detto ``triatomico'', a cui segue l'era del ``bandeggio'' e infine, in questi ultimi anni l'era ``molecolare''. Nel 1882 il biologo tedesco Walther Flemming ( ) individuava i filamenti che si separano in una cellula al momento della sua divisione e duplicazione, distribuendosi successivamente nelle due cel- 1 La citogenetica (il prefisso cito deriva dal greco kytos = "contenitore", e indica la cellula) studia l'assetto cromosomico delle cellule (cariotipo). In seguito a mutazioni il cariotipo puoá modificarsi nel numero o nella morfologia dei cromosomi che lo costituiscono, dando cosõá origine alle anomalie numeriche dei cromosomi (aneuploidie) e alle anomalie strutturali (delezioni, duplicazioni, inversioni, traslocazioni) dei cromosomi rispettivamente. Le anomalie cromosomiche sono distinte in costituzionali, riscontrabili in tutte le cellule di un individuo (corredo cromosomico omogeneo) o in una percentuale di esse (corredo cromosomico a mosaico) e acquisite (limitate ad un tessuto o ad una linea cellulare). 2 Nell'etaÁ definita oscura, fino al 1952, si conoscevano le tecniche di coltura delle cellule dei tessuti dei mammiferi ed erano note quelle per bloccare la divisione cellulare durante la metafase. Era possibile visualizzare i cromosomi, ma non si riusciva a determinare con precisione quanti costituivano il corredo delle cellule umane. Le tecniche non permettevano una separazione soddisfacente dei cromosomi, che apparivano come gruppi di corpuscoli scuri (etaá oscura) in contrasto ad aree chiare. 3 L'etaÁ ipotonica si apre nel 1952 e deve il suo nome ad una soluzione con una concentrazione di sali piuá debole rispetto ai liquidi fisiologici contenuti in una qualsiasi cellula di mammifero. Con questa soluzione si provoca un passaggio di liquidi dall'esterno all'interno della cellula, attraverso la membrana che la delimita rigonfiandola. Questo rigonfiamento permetteva di separare meglio i cromosomi contenuti nella cellula durante la divisione.

2 : La nascita della citogenetica clinica lule-figlie 4. Sei anni dopo, nel 1888, l'anatomista tedesco Heinrich Wilhelm Gottfried von Waldeyer-Hartz ( ) denominava ``cromosomi'' (``corpi colorati'') i filamenti scoperti da Flemming. A quel tempo l'embriologo e citologo belga Edouard Van Beneden ( ) aveva giaá enunciato la sua teoria secondo la quale queste strutture provengono equamente dall'unione dei nuclei di due cellule germinali, ciascuna per ogni genitore. Nel 1902 il genetista americano Walter Stanford Sutton ( ) ipotizzava che i cromosomi siano i ``contenitor'' dei fattori ereditari che si trasmettono alla discendenza e che gli stessi sarebbero formati da ``collane'' di elementi di base dei caratteri ereditari, che il botanico danese Wilhelm Ludwig Johansen ( ) per la prima volta chiamoá ``geni''. Negli anni seguenti apparvero numerose pubblicazioni con diverse stime del numero di cromosomi umani 5, ma i progressi furono limitati soprattutto da due difficoltaá tecniche: 1) la preparazione delle microsezioni effettuata con le normali tecniche istologiche spesso alterava le mitosi; 2) i cromosomi tendevano a sovrapporsi e ad aggrovigliarsi tra loro. Queste difficoltaá furono superate solo all'inizio degli anni Cinquanta, grazie agli studi di Arthur Hughes e di T.C. Hsu (1952), i quali apportarono 4 Nel 1879 Walther Flemming vide che certe tinture rosse erano in grado di far risaltare piccoli granuli all'interno del nucleo cellulare che il biologo chiamoá ``cromatina''. Fleming fu in grado di seguire i cambiamenti che avvengono nel processo di divisione cellulare e nel 1882 pubblicoá i risultati delle sue ricerche. Aveva osservato che durante la divisione di una cellula, all'interno del nucleo la cromatina si addensava in filamenti che si disponevano a forma di stella (aster); successivamente l'aster si suddivideva, metaá da una parte e metaá dall'altra, dentro le due cellule che risultavano dal processo di divisione. Flemming chiamoá questo processo ``mitosi'' (``filo''), giaccheâ sembrava che questi filamenti di cromatina avessero un ruolo cruciale nella fase di divisione cellulare. 5 Rilevante, tra questi primi contributi, fu il lavoro del fisico viennese Felix Von Winiwarter ( ) nel Egli esaminoá preparati istologici testicolari di quattro uomini (di 21, 23, 25 e 41 anni), fissati e tagliati in sezioni di soli 7,5 mmdi diametro, il che impediva di contare i cromosomi. Fu possibile esaminare 32 mitosi spermatogoniche: in 29 egli contoá 47 elementi, in 2, 46 e in una, 49. Furono valutate 60 piastre diploteniche: 57 mostrarono 24 elementi, due sembravano averne 25 e una 23. Nelle diploteniche, osservoá anche i cromosomi sessuali, ma li descrisse come un unico cromosoma che veniva trascinato ad un polo. Concluse che i maschi umani avevano 47 cromosomi e le femmine 48. La pubblicazione che suscitoá maggiormente l'interesse scientifico fu quella di Theophilus Painter che esaminoá i testicoli di tre persone ricoverate al Texas State Insane Asylume sottoposte a castrazione, intesa come necessaria a causa della loro condizione di pazzia. In un lavoro preliminare l'autore affermoá che il numero di cromosomi era 46 o 48, ma nella relazione finale decise in favore di 48 cromosomi. Painter riuscõá anche a descrivere che il bivalente sessuale, nella prima divisione meiotica, era formato dai cromosomi X e Y che all'anafase migravano ai poli opposti della cellula (T. S. PAINTER, Studies in mammalian spermatogenesis II: The spermatogenesis of man, ``Journal of Experimental Zoology'', 1923, 37, pp ). Nel periodo tra le due guerre mondiali furono realizzati numerosi studi sui cromosomi umani, soprattutto su sezioni testicolari, i quali confermarono le conclusioni di Painter, fissando il numero di cromosomi nelle cellule somatiche umane a 48, senza aggiungere nuove conoscenze.

3 Elena Ferioli, Giuseppe Armocida 177 alcune importanti innovazioni tecniche nei metodi di studio cromosomico e in particolare l'uso, al posto delle sezioni istologiche, di sospensioni cellulari intatte che potevano essere schiacciate o semplicemente essiccate all'aria, noncheâ il trattamento delle cellule, per breve tempo, con una soluzione ipotonica, per provocarne il rigonfiamento e la rottura, in modo da disperdere all'esterno i cromosomi per ottenerne una piuá distinta visualizzazione. Grazie a questa metodologia si avevano dei vantaggi: nulla andava perso, si aveva una osservazione diretta sui cromosomi, la fissazione era piuá facile e la velocitaá minimizzava gli effetti indesiderati della degradazione dei cromosomi nel tempo. La tecnica dello shock ipotonico aprõá la via ad un piuá facile conteggio dei cromosomi. Nell'estate del 1955 un citogenetista svedese, Johan Albert Levan ( ), visitoá Hsu a New York e imparoá la tecnica dei preparati per schiacciamento usando lo shock ipotonico. Levan inizioá una collaborazione con un giovane ricercatore, Joe Hin Tjio ( ), lavorando su fibroblasti di polmone fetale opportunamente pretrattati con una soluzione acida ipotonica con cui i nuclei, una volta caduti sul vetrino riversavano il contenuto cromosomico. Grazie alla colchicina aggiunta alle cellule di coltura i cromosomi non si univano nel fuso mitotico ed erano quindi visibili separatamente; inoltre il metodo innovativo di fissare il preparato sul vetrino con acido acetico, permetteva di ottenere immagini molto nitide che Tjio poteâ agevolmente fotografare e di separare piastre cromosomiche correttamente per ottenere un cariotipo completo, come lo conosciamo oggi. Il lavoro di Tjio e Levan fu pubblicato il 26 gennaio 1956 sulla rivista scandinava ``Hereditas'' 6. Queste osservazioni sperimentali furono rapidamente confermate da C.E. Ford e J.L. Hamerton (1956) 7. Trascorsero circa tre anni prima che fosse descritto il primo cariotipo anomalo nell'uomo e che iniziasse, cosõá, il periodo delle trisomie, con il quale i citogenetisti rivolsero l'attenzione verso pazienti che presentavano anomalie congenite mediante approcci di citogenetica clinica. La scoperta, nel 1958, dell'anomalia genetica (trisomia del cromosoma 21) che causa la Sindrome di Down si deve a Lejeune 8 che riferõá di aver 6 J. H. TJIO,A.LEVAN, The chromosome number of man, ``Hereditas'', 1956, 42, pp. 1-6, discutendo le loro conclusioni, fecero riferimento a tre ricercatori svedesi che avevano studiato mitosi in cellule di fegato di embrioni umani abortiti un anno prima. Il loro studio era stato interrotto percheâ non riuscivano a contare 48 cromosomi: in tutte le cellule ne avevano trovati 46. Tjio e Levan furono molto prudenti nelle conclusioni: ``Non vogliamo generalizzare le nostre scoperte con l'affermazione che il numero cromosomico nell'uomo eá 2n = 46, prima di aver effettuato un nuovo accurato controllo del numero cromosomico nelle mitosi spermatogoniche nell'uomo, ma eá difficile non concludere che questa sembrerebbe la spiegazione piuá naturale delle nostre osservazioni''. 7 C. E. FORD, J.L.HAMERTON, The chromosomes of man, ``Acta genet'', 1956/1957, 6, pp Il pediatra e genetista Jerome Jean Louis Marie Lejeune (Montrouge, 26 giugno

4 : La nascita della citogenetica clinica individuato la presenza di 47 cromosomi in colture di tessuto prelevato da tre individui con quella sindrome. L'anno seguente, con i colleghi Raymond Alexander Turpin e Marthe Gautier, pubblicoá i risultati delle sue ricerche 9. Rivelando i meccanismi di disordini cromosomici, si apriva la strada della moderna citogenetica clinica. La scoperta ebbe risonanza non solo percheâ faceva luce sull'origine di questa particolare sindrome, ma soprattutto percheâ, per la prima volta, una patologia veniva correlata all'alterazione del numero di cromosomi. Successivamente, con i suoi collaboratori, scopriva il meccanismo di altre malattie cromosomiche e apriva cosõá la via alla citogenetica ed alla genetica moderna. Subito dopo furono scoperte la trisomia del cromosoma 13 nella sindrome di Patau 10 e la trisomia 18 in 1926-Parigi, 3 aprile 1994) si era laureato in medicina nel La trisomia 21 eá dovuta al meccanismo di non disgiunzione che ha origine quando, durante la formazione dei gameti, le coppie di cromosomi 21 non si separano (soprattutto negli ovuli materni e molto piuá raramente negli spermatozoi). L'ovulo o gli ovuli che ne risultano avranno cosõá una copia in piuá del cromosoma 21 rispetto al normale. La trisomia 21 dovuta a non disgiunzione eá anche detta trisomia primaria (Trisomia primaria omogenea presente in tutte le cellule o Trisomia primaria a mosaico presente solo in una parte delle cellule). In un numero molto piuá basso di casi, la trisomia eá dovuta ad un processo chiamato traslocazione. Nella SD dovuta a traslocazione le persone affette hanno apparentemente un numero normale di cromosomi. In realtaá possiedono tre copie del cromosoma 21, ma una di queste (o una parte importante) eá fusa ad un altro cromosoma. Gli affetti da Down da traslocazione nascono in genere da genitori perfettamente normali, di cui uno (generalmente la madre) eá portatore della traslocazione. Per la prima volta si stabiliva un legame tra uno stato di disabilitaá mentale ed una aberrazione cromosomica. Lejeune fu il primo a promuovere l'uso dell'acido folico come prevenzione della spina bifida. Fu consulente delle Nazioni Unite come esperto sulle radiazioni atomiche. Nel 1964 divenne professore di Genetica Fondamentale all'universitaá di Parigi e nel 1965 direttore del servizio di genetica dell' HoÃpital des Enfantes Malades di Parigi. Si interessoá di manipolazioni genetiche su cellule somatiche e cellule riproduttrici, di fecondazione in vitro e di manipolazione del feto. Alla guida dell'unitaá di citogenetica clinica dell'hoãpital Necker-Enfantes Malades di Parigi, eesaminoá cariotipi di pazienti e seguõá piuá di persone con difetti dell'intelligenza. StudioÁ diverse sindromi cromosomiche (monosomie, trisomie, delezioni e translocazioni autosomiche; sindromi di Klinefelter, di Turner e X-fragile; mosaicismi). Nel 1974 divenne membro dell'accademia Pontificia delle Scienze e Giovanni Paolo II lo volle primo presidente della Pontificia Accademia per la Vita, istituita l'11 febbraio del 1994, poche settimane prima della sua morte. Ricevette numerosi riconoscimenti di merito (nel 1962 il premio Kennedy, nel 1969 il William Allen Memorial Award e nel 1993 il premio Griffuel per il lavoro pionieristico sulle anomalie cromosomiche nel cancro). E Á autore di La ProgeneÁse (Parigi, 1954), Les Chromosomes Humaines (con R.Turpin, Parigi, 1965), Le Malattie Cromosomiche (con E.Dutrillaux, Milano, 1972) e di oltre 340 articoli. 9 J. LEJEUNE, M. GAUTIER, R. TURPIN, Les chromosomes humains en culture de tissus, ``Comptes Rendus de l'acadeâmie des Sciences'', 1959, 248, pp ; Etudes des chromosomes somatiques de neuf enfants mongoliens, ``Comptes Rendus de l'acadeâmie des Sciences'' 1959, 248, pp ; The Chromosomes of Man, ``Lancet'', 1959, pp ; Le mongolisme. Premier example d'aberration autosomique humaine, ``Annales de geâneâtique'', 1958/ 1959, 1. pp ; Mongolisme; une maladie chromosomique (trisomy), ``Bulletin de l'acadeâmie nationale de meâdecine'', Paris, 1959, 143, La sindrome di Patau si manifesta con frequenza di 1/5000, 1/20000 bambini nati,

5 Elena Ferioli, Giuseppe Armocida 179 quella di Edward 11. Durante questo periodo si scoprirono anomalie numeriche (in eccesso o in difetto) che coinvolgono anche i cromosomi del sesso X ed Y, con la sindrome di Turner (XO) 12 e la sindrome di Klinefelter (XXY) 13. La sindrome di Turner, anche detta disgenesia gonadica, prende il nome dall'endocrinologo statunitense Henry Hubert Turner che descrisse questa malattia in maniera piuá accurata, nel Nel 1959 eá stata classificata tra le malattie da aberrazione cromosomica da C. E. Ford 14. La sindrome di Klinefelter (KS) fu descritta per la prima volta nel 1942 da Harry F. Klinefelter come una patologia endocrina che si manifesta con un quadro clinico caratterizzato da testicoli di ridotte dimensioni, ginecomastia bilaterale, ipogonadismo ipergonadotropo e un alterato metabolismo degli steroidi sessuali, secondario alla scarsa concentrazione ematica di androgeni 15. La sindrome fu caratterizzata dal punto di vista patogenetico 17 anni piuá tardi, nel 1959, quando Jacobs e Strong dimostrarono che i maschi affetti da KS non possedevano un normale cariotipo 46, XY, ma presentavano almeno un cromosoma X soprannumerario 16.La per lo piuá femmine. Il cariotipo dell'individuo affetto presenta tre copie del cromosoma 13, per cui questa sindrome viene anche chiamata Trisomia La sindrome di Edwards si manifesta con una frequenza di 1/3000, 1/8000 dei nuovi nati, prevalentemente femmine, con malformazioni congenite multiple in quasi tutti gli organi e ritardo di sviluppo psico-motorio. 12 La sindrome di Turner eá legata ad un'anomalia citogenetica, principalmente di tipo X0 conseguente ad un errore nel corretto appaiamento dei cromosomi durante la meiosi. Gli individui presentano una monosomia completa o parziale del cromosoma X. La principale causa della sindrome eá la non disgiunzione del cromosoma sessuale durante la meiosi, nella gametogenesi, che porta alla formazione di gameti aventi un sovrannumero di questi o la totale assenza. Solitamente la non disgiunzione eá dovuta ad un errore nella spermatogenesi che provoca la perdita del cromosoma sessuale paterno. Dall'unione di un gamete privo di cromosomi sessuali e uno normale contenente il cromosoma X nascono individui affetti da questa sindrome. Gli individui con la sindrome di Turner sono femmine. 13 La sindrome di Klinefelter eá causata dalla presenza di un cromosoma in piuá nella coppia di cromosomi sessuali: il cariotipo piuá frequente eá 47, XXY. PiuÁ raramente eá un mosaicismo 46,XY/47,XXY o un cariotipo X(n)Y. Gli individui affetti da sindrome Klinefelter sono maschi aneuploidi, cioeá con un assetto di cromosomi alterato. 14 C. E. FORD, K. W. JONES, P. E. POLANI, J. C. DE ALMEIDA, J. H. BRIGGS, A sexchromosome anomaly in a case of gonadal dysgenesis (Turner's syndrome), ``Lancet'', 1959, Apr 4, 1(7075), pp H.F. KLINEFELTER, E.C. REIFENSTEIN, F. ALBRIGHT, Syndrome characterized gynecomastia, aspermatogenesis without A-Leydigism, and increased excretion of follicle-stimulating hormone, ``J Clin Endocrinol'', 1942, 2, pp P.A. JACOBS, A. PATRICIA, J.A. STRONG, A case of human intersexuality having a possible XXY sex determining mechanism, ``Nature'', 1959, 183, pp ; P.A. JACOBS, A. G. BAIKIE, W. M. COURT BROWN, H. FORREST, J. R. ROY, J. S. STEWART e B. LENNOX, Chromosomal Sex in the Syndrome of Testicular Feminisation, ``Lancet'', 2, 1959, pp ; C. E. FORD, K. W. JONES, O. J. MILLER, U. MITTWOCH, L. S. PENROSE, M. RIDLER e A. SHAPIRO, The Chromosomes in a Patient Showing Both Mongolism and the Klinefelter Syndrome, ``Lancet'', 1959, 273, 7075, pp ; C. E. FORD, P. E. POLANI, J. H. BRIGGS e P.

6 : La nascita della citogenetica clinica sindrome di Edwards fu individuata per la prima volta come entitaá specifica nel 1960 grazie alla scoperta di un extra-cromosoma 18, in neonati con un insieme particolare di malformazioni, da tre gruppi indipendenti di ricercatori: Edwards, Patau e Smith. Patau descrisse la trisomia 13 (sindrome di Patau) nello stesso anno in cui Edwards descrisse la trisomia L'anno successivo il coloboma 18 (sindrome degli occhi di gatto) si dimostroá essere causato da una trisomia parziale o totale a carico del cromosoma Nel 1971 la trisomia 8 detta anche sindrome di Warkany 20 eá stata descritta per la prima volta da De Grouchy e collaboratori 21. Gli effetti di questa sindrome, quali ritardo mentale, dismorfismi craniofacciali, anomalie degli arti e del tronco, malformazioni genitourinari e difetti cardiovascolari nella maggior parte dei casi sono dovuti a un mosaico; si puoá verificare una riduzione nel tempo delle cellule con la trisomia del cromosoma 8 ed in alcuni casi si verifica la loro scomparsa 22. Sempre agli inizi degli anni Settanta eá stata individuata la trisomia a carico del cromosoma 9 che causa microcefalia, ritardo mentale, fessure palpebrali strette, criptorchidismo, lussazione congenita dell'anca, cardiopatia congenita spesso fatale 23. L' identificazione del ``minute chromosome'', il cromosoma Philadelfia, nei pazienti affetti da leucemia mieloide cronica (LMC) fatta da Peter Nowell, della University of Pennsylvania School of Medicine, e David Hunger- M. BISHOP, A Presumptive Human XXY/XX Mosaic, ``Nature'', 1959, 183, 4667, pp J. H.EDWARDS, D. G. HARNDEN, A. H. CAMERON, V. M. CROSSE e O. H. WOLFF, A new trisomic syndrome, ``Lancet'', 1960, 1, P. 787; K. PATAU, D.W.SMITH, E.THERMAN, S.L. INHOR e H. P. WAGNER, Multiple congenital anomaly caused by an extra autosome, ``Lancet'', 1960, 1, p. 790; D. W. SMITH, K. PATAU,E. THERMAN e S. L. INHORN, A new autosomal trisomy syndrome: multiple congenital anomalies caused by an extra chromosome, ``J. Pediat'', 1960 Sep., 57, pp W. S. DUKE-ELDER, Typical colobomata, in ``Textbook of Ophthalmology'', v. 2, St. Louis 1940, pp P. J. WAARDENBURG, A. FRANCESCHETTI E D. KLEIN, Colobomas, in ``Genetics and Ophthalmology'', v. I, Assen 1961, pp J. WARKANY, C.B. ROTH, J. B. WILSON, Multiple congenital malformations; a consideration of etiologic factors, ``Pediatrics'', 1948 Apr, 1(4), pp J. DE GROUCHY, C. TURLEAU, C. LeÂ ONARD, Study by fluorescence of a trisomy C mosaic, probably 8: 46, XY-47, XY, `Ànn Genet'', 1971 Mar, 4(1), pp T. CASPERSSON, J. LINDSTEN, L. ZECH, K. E. BUCKTON e W. H. PRICE, Four patients with trisomy 8 identified by the fluorescence and Giemsa banding techniques, ``Journal of Medical Genetics'', 1972, 9, pp. 1-7; P. JACOBSEN, M. MIKKELSEN, Trisomy 8 syndrome, `Ùgeskr Laeger'', 1974 Jul, 22, 136 (30), p M.-O. RETHORE, L. LARGET-PIET, D. ABONYI, M. BOESWILLWALD, R. BERGER, S. CARPENTIER, J. CRUVEILLER, B. DUTRILLAUX, J. LAFOURCADE, M. PENNEAU ej. LEJEUNE, Sur quatre cas de trisomie pour le bras court du chromosome 9. Individualisation d'une nouvelle entite morbide, `Ànnales de Genetique'', 1970, 13,

7 Elena Ferioli, Giuseppe Armocida 181 ford, dell'institute for Cancer Research nel rappresenta la seconda cruciale scoperta di questo periodo: i tumori comportano spesso alterazioni nella struttura dei cromosomi da cui lo sviluppo della citogenetica oncologica e quindi lo studio di riarrangiamenti strutturali dei cromosomi nella cancerogenesi. La prima definizione di cariotipo fu formulata alla Conferenza di Denver nel 1960 utilizzando criteri di lunghezza del cromosoma e di posizione del centromero. Le coppie erano enumerate in ordine decrescente di grandezza e gli eterosomi erano indicati come X e Y. In seguito, nella Conferenza di Chicago del 1966 eá stata messa a punto una nomenclatura piuá dettagliata, nella quale i cromosomi sono raggruppati in sette gruppi, nominati con le lettere maiuscole da A a G. A partire dal 1970 l'avvento di raffinate tecniche di bandeggio ha successivamente consentito una classificazione e uno studio accurato dei cromosomi. Le tecniche di colorazione con sostanze fluorescenti, oppure la colorazione dopo digestione enzimatica o dopo denaturazione termica, evidenziano un bandeggio cromosomico trasversale. Queste metodiche non permettono solamente di distinguere cromosomi dotati di grandezza e morfologia simili, ma anche di individuare regioni specifiche con un enorme vantaggio nello studio delle anomalie. Secondo le diverse tecniche utilizzate, sono state distinte le bande Q, C, GoR 25. Nel 1973, tredici anni dopo Philadelphia, fu l'universitaá di Chicago, con Janet Rowley, a compiere il successivo passo importante: la Rowley e i suoi collaboratori scoprirono che la porzione di DNA mancante dal cromosoma 22 - quella che identifica la LMC - era passata al cromosoma 9 e viceversa 26. La scoperta dei fenomeni di riarrangiamento cromosomico permise in seguito ai ricercatori di identificare molte anomalie citogenetiche in vari tipi di tumori e sindromi. 24 P. C. NOWEL, D. A. HUNGERFORD, A minute chromosome in human chronic granulocytic leukemia, ``Science'', 1960, 132, p Bande Q: i cromosomi colorati con mostarda di Quinacrina, e osservati in fluorescenza, mostrano bande trasversali fluorescenti parallele, la cui disposizione eá caratteristica per ciascun cromosoma; Bande C: vengono siglate da Constitutive e si possono ottenere per denaturazione, con una soluzione di urea riscaldata a 87ëC; colorano prevalentemente i centromeri e l'eterocromatina; Bande G: le tecniche impiegate per ottenerle richiedono la colorazione con Giemsa, i cromosomi vengono trattati a temperatura ambiente con una soluzione di enzimi (pronasi, tripsina, achimotripsina), le bande ottenute sono simili alle bande Q; bande R: sono il Reversal delle bande Q e si ottengono per denaturazione termica, i vetrini vengono immersi per minuti in una soluzione di Earle a ph 6,5 riscaldata a 87ëC. 26 J. D. ROWLEY, Letter: A new consistent chromosomal abnormality in chronic myelogenous leukaemia identified by quinacrine fluorescence and Giemsa staining, ``Nature'', 1973, 1, 243 (5405), pp

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