eucarioti Cellula umana contiene circa geni
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- Marina Fiori
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1 Eucarioti
2 eucarioti Cellula umana contiene circa geni Geni per RNA Geni per proteine Ogni cellula in un determinato momento esprim e solo una piccola parte di questo potenziale ( 5000 geni) Geni housekeeping Geni tessuto - specifici
3 La trascrizione in vitro ed in vivo In vitro le RNA pol attivano la trascrizione genica in modo efficiente In vivo non accade, perché? Fattori accessori utili ad iniziare la trascrizione ma non appartenenti alla RNA pol Possono agire in cis o in trans
4 Trascrizione
5 Eucarioti Nei procarioti la trascrizione è uno stampo di DNA Eucarioti cromatina. Impedimento da parte degli ottameri istonici Un solo fattore sigma lega i promotori nei procarioti Negli eucarioti un gran numero di fattori deve legarsi per reclutare la RNA pol.
6 trascrizione
7 Eucarioti
8 Eucarioti RNA pol I trascrive gli rrna 18S/28S nel nucleolo RNA pol II trascrive mrna e piccoli RNA nel nucleoplasma RNA pol III trascrive trna, rrna 5S e piccoli RNA nel nucleoplasma
9
10 eucarioti Core promoter (nucleo) elementi in cis Elementi in cis (necessari a legare la RNA pol) La RNA pol si lega al sito d inizio non in modo diretto non a monte. Diversi tipi di promotori; per la Pol II molto complessi e diversi.
11 Eucarioti Hanno circa 12 subunità 500 kda Molte subunità in comune RNA pol isolata non è capace di iniziare selettivamente dai promotori La subunità maggiore di Polo II ha un CTD
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13 Rilassamento della cromatina
14 Trascrizione
15 Maturazione RNA
16 Trascrizione
17 Percentuali di RNA 1% 14% rrna28 S;18S; 5S trna,snrna 85% mrna
18 promotori Elementi del core o elementi cis di legame Elementi di regolazione 1) transcription factor binding sites 2) regulatory units (promoters, enhancers, and silencers) 3) regulatory regions (3 and 5 regulatory regions, exons, and introns).
19 Trascrizione
20 Promotori
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24 Promotore Pol II
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27 Trascrizione
28 Fattori generali di trascrizione Sequenze regolatrici legano attivatori o repressori: 1) sequenze attivatrici a monte (UAS) 2) enhancer; 3) Iniziatore (Inr) 4) Silenziatori (Si) 5) Isolatori (Ins) ESEMPI: 1) TFIID attraverso TBP lega (TATA) 2) TFIIB lega (BRE) 3) DPE ed DCE legano TFIID
29 Eucarioti Fattori generali di trascrizione della RNA pol II
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33 Complesso di preinizio
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43 CTD
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46 Fattori di allungamento della trascrizione P-Tefb CDK9 fosforila la serina 2 determinando : allungamento, splicing e poliadenilazione TF2H fosforila la serina 5 permettendo di reclutare gli enzimi del capping sulla estremità 5 La terminazione inizia con cicli di defosforilazione (fosfatasi) Ser5 (Scp1) ser2 (Fcp1)
47 Fattori di allungamento Altri fattori sono TFIIS ; editing idrolitico. hspt5 anche capping Famiglia ELL limitano il tempo di fermata della RNA pol II sulle sequenze
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49 1) Sequenza o reclutamento ordinato dei fattori 2) la fosforilazione della coda è necessaria per il rilascio del promotore 3) la fosforilazione pone termine all inizio abortivo 4) gli ottameri istonici devono essere rimossi 5) fattori di allungamento e fasi della trascrizione
50 1) La fosforilazione da parte di TEF-b sulla coda permette di reclutare FACT facilitates chromatin transcription eterodimeri che smantellano i nucleosomi per ricomporli dopo il passaggio del RNA polimerasi
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53 Complesso del mediatore
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56 Capping Maturazione Capping Pliadenilazione splicing
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60 Coda poli-a Taglio del messagero Aggiunta di A all estremità 3 tramite la poli-a-polimerasi Degradazione dell RNA associato al RNA pol attraverso una ribonucleasi 5-3 Termine della trascrizione
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62 Termine trascrizione
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64 Coda poli-a
65 Enhancer attiva il promotore più vicino a qualunque distanza Porta alla formazione di complessi che interagiscono direttamente o indirettamente con il promotore Agiscono in modo bidirezionale Elemento CAAT Spesso si trovano più copie di questi elementi modulari, perciò legano vari tipi di fattori di trascrizione Agiscono in cis
66 Fattori di trascrizione architettonici
67 Metil-5-citosina
68 CpG 1-2kB Alcune sono conservate
69 CpG island
70 Metilazione dei promotori
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72 Unità di trascrizione è composta da Ripetizioni in tandem Alternate da spaziatori non trascritti costituti da un numero variabile Organizzatori nucleolari
73 RNA pol I
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81 Trascrizione
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