Angela Santilio. Istituto Superiore di Sanità Dipartimento Ambiente e Salute
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- Bartolomeo Belloni
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1 I METODI DI ANALISI PER I PRODOTTI FITOSANITARI NELL AMBITO DEI TEST INTER-LABORATORIO INTERNAZIONALI Corso ID 005C17 Metodi analitici per il controllo ufficiale dei prodotti fitosanitari. Angela Santilio Istituto Superiore di Sanità Dipartimento Ambiente e Salute angela.santilio@iss.it
2 INTRODUZIONE Nell ambito del sistema di verifica del dato analitico è importante la partecipazione ai circuiti di validazione dei metodi di analisi e ai circuiti inter-laboratorio (Proficiency Test - PT) europei ed internazionali. PT- Federal Laboratory for Food Safety (FASFC) Belgio organizza Proficiency test su: contenuto di sostanza attiva in pp.ff proprietà chimico fisiche e tecnologiche dei pp.ff Contatto: alain.dubois@afsca.be PT Association of American Pesticide Control Official (AAPCO) organizza Profociency test su contenuto di sostanza attiva in pp.ff. wanp@purdue.edu
3 PROFICIENCY TEST Istituto Superiore di Sanità Reparto Antiparassitari 2015 PT- Association of American Pesticide Control Official (AAPCO) Sostanza attiva Tipologia formulazione Tecnica strumentale Concentrazione (% p/p) Risultato (% p/p) Z-score Propiconazole Liquido HPLC/DAD 14,3% 14,5% 0,39 Deltametrina Polvere HPLC/DAD 0,05% 0,04% -0,22 Sulfentrazone Liquido HPLC/DAD 1,36% 1,43% 1,77 Prodiamine Liquido GC/FID 2,73% Z-score = -3.5 z-score 3,5 fuori intervallo - non accettabile
4 PROFICIENCY TEST Istituto Superiore di Sanità Reparto Antiparassitari 2016 PT- Association of American Pesticide Control Official (AAPCO) Sostanza attiva Tipologia formulazione Tecnica strumentale Concentrazione (%) Risultato Z-score Glifosate Liquido HPLC/DAD 30.38% 32.75% 2,19 Imidacloprid Granulare HPLC/DAD 0,5% 0,54% 0,97 Lambda Cialotrina Granulare GC/FID 0,1% ,4-D Liquido HPLC/DAD 41.5% Acido equivalente 41.3% Acido equivalente Z-score = -3.5 z-score 3,5 fuori intervallo - non accettabile
5 VERIFICA DATO ANALITICO Istituto Superiore di Sanità Reparto Antiparassitari 2017 PT- Association of American Pesticide Control Official (AAPCO) Sostanza attiva Tipologia formulazione Tecnica strumentale Concentrazione (%) Risultato Z-score* Atrazina Liquido/emulsione HPLC/GC % 3.70% --- Acetamiprid Liquido HPLC/DAD % 8.89% ---- Penoxulam Granulare HPLC/DAD 0, % 0.04 % ---- Prometon Pellets HPLC/GC 4,0 6.0% *in corso Z-score = -3.5 z-score 3,5 fuori intervallo - non accettabile
6 METODI L organizzazione dei PT promuove l uso dei metodi applicati dai laboratori nell ambito dei propri programmi di monitoraggio. Se richiesti l organizzazione invia i metodi di analisi disponibili. Nell ambito dei PT sono stati applicati metodi di analisi CIPAC, metodi forniti dall organizzazione e metodi disponibili dalla raccolta dell ISS.
7 METODI Le sostanze inserite nei PT riflettono i programmi di monitoraggio previsti negli Stati Uniti. Comunque la partecipazione ai PT può essere usata come esercizio del laboratorio per verificare le proprie prestazioni analitiche. Alcune sostanze sono incluse nel programma di monitoraggio nazionale come il Glifosate, Deltametrina, Propiconazole, Prodiamina, Imidacloprid, Lambda Cyalotrina, Acetamiprid, Penoxulam, Prometon.
8 METODI Sostanza attiva Tipologia formulazione Tecnica strumentale Concentrazione (% p/p) Metodo Propiconazole Liquido HPLC/DAD 14,3% Metodo ditta (HPLC) CIPAC MT 408 Deltametrina Polvere HPLC/DAD 0,05% Metodo ditta (HPLC) CIPAC MT 333 Sulfentrazone Liquido HPLC/DAD 1,36% Metodo ditta (HPLC) Prodiamine Liquido GC/FID 2,73% Metodo ditta (GC/FIC)
9 METODI Sostanza attiva Tipologia formulazione Tecnica strumentale Concentrazione (%) Metodo Glifosate Liquido HPLC/DAD 30.38% CIPAC MT 284 (HPLC) J. Of AOAC International 2008, Vol. 91, (1) (HPLC) Imidacloprid Granulare HPLC/DAD 0,5% CIAPC MT 582 (HPLC) Ditta (HPLC) Lambda Cialotrina Granulare GC/FID 0,1% CIPAC MT 463 (HPLC) Ditta (GC/FID) 2,4-D Liquido HPLC/DAD 41.5% Acido equivalente Ditta (HPLC)
10 METODI Sostanza attiva Tipologia formulazione Tecnica strumentale Concentrazione (%) Metodo Atrazina Liquido/emulsion e HPLC/GC 4% CIPAC MT 91(GC/FID, HPLC) EPA 2 e , 1982 Acetamiprid Liquido HPLC/DAD 8,6% CIPAC MT 649 (HPLC) Metodo Ditta (HPLC) Penoxulam Granulare HPLC/DAD 0,04% Metodo Ditta (HPLC) Prometon Pellets HPLC/GC 5,0% Metodo EPA (GC/FID)
11 Determinazione 2,4-D Saponificazione con KOH + H2O + CH3OH Pesare una quantità di campione mg circa in un pallone da 10 ml. Aggiungere 9 ml di soluzione di saponificazione Agitare e sonicare per circa 1 minuto fino a completa dissoluzione. Portare a volume e lasciare tutta la notte Filtrare su anotop da 0.2 mm e iniettare
12 Determinazione 2,4-D Determinazione strumentale HPLC/DAD Colonna: ZORBAX SB C mm X 4.6 mm; 5mm Fase mobile: CH3OH acido acetico 9.3%/H2O Isocratica Flusso: 1 ml/min Temperatura colonna: 40 C Volume iniettato: 10 ml DAD: 280 nm
13 Determinazione Glifosate Pesare una quantità di campione tale da ottenere una soluzione 0.3%. Diluire in acqua sonicare per 3 minuti fino a completa dissoluzione. Agitare e portare al volume finale Filtrare su anotop da 0.2 mm e iniettare
14 Determinazione Glifosate HPLC/DAD Colonna: Dionex Ion Pac AS mm X 2 mm Fase mobile: CH3OH/KH2PO4 6mM ph= 2.0 Isocratica Flusso: 0.25 ml/min Temperatura colonna: 25 C Volume iniettato: 10 ml DAD: 205 nm
15 Determinazione Imidacloprid - MT582 Pesare una quantità di campione tale da contenere 75 mg di Imidacloprid in un pallone da 50 ml. Aggiungere 15 ml di CH3CN e sonicare per 15 minuti. Agitare il sedimento, attendere che la soluzione sia a temperatura ambiente. Portare al volume finale con acqua Filtrare su anotop da 0.2 mm e iniettare
16 Determinazione Imidacloprid HPLC/DAD Colonna: ZORBAX SB-C mm X 4.6 mm; 5mm Fase mobile: CH3CN/tampone citrato Isocratica Flusso: 1.0 ml/min Temperatura colonna: 40 C Volume iniettato: 5 ml DAD: 260nm
17 Determinazione Propiconazole Pesare una quantità di campione 0,175 g in un pallone da 100 ml. Diluire con 50 ml di fase mobile e sonicare per 10 minuti. Attendere che la soluzione sia a temperatura ambiente. Portare al volume finale con la fase mobile. Filtrare su anotop da 0.45 mm e iniettare
18 Determinazione Propiconazole HPLC/DAD Colonna: ZORBAX Eclipse XDB C mm X 2.1 mm; 3.5mm Fase mobile: CH3CN/H2O acidificata con H2SO4 Isocratica Flusso: 1.0 ml/min Temperatura colonna: 25 C Volume iniettato: 10 ml DAD: 225 nm
19 Determinazione Deltametrina Pesare una quantità di campione corrispondente a 25 mg di deltametrina in un pallone da 50 ml. Diluire con CH3CN acidificata con acido acetico 0.2% e sonicare per 15 minuti. Attendere che la soluzione sia a temperatura ambiente. Portare al volume finale con il solvente di estrazione. Filtrare su anotop da 0.2 mm e iniettare
20 Determinazione Deltametrina HPLC/DAD Colonna: Ultra Cyano 150 mm X 3.2 mm; 5mm Fase mobile: CH3CN/H2O acidificata con CH3COOH 5% Isocratica Flusso: 0.4 ml/min Temperatura colonna: 40 C Volume iniettato: 2 ml DAD: 240 nm
21 Determinazione Sulfentrazone Pesare una quantità di campione tra mg in un pallone da 50 ml. Diluire con 10 g di CH3CN e sonicare per 10 minuti. Attendere che la soluzione sia a temperatura ambiente. Filtrare su anotop da 0.2 mm e iniettare
22 Determinazione Sulfentrazone HPLC/DAD Colonna: Zorbax Sb phenyl 150 mm X 4.6 mm; 3.5 mm Fase mobile: CH3CN/H2O acidificata con CH3COOH 5% Isocratica Flusso: 0.4 ml/min Temperatura colonna: 25 C Volume iniettato: 10 ml DAD: 280 nm
23 Determinazione Prometon Pesare una quantità di campione corrispondente a 600 mg di prometon in un pallone da 250 ml. Diluire con una soluzione di dibutyl phathalate in chloroformio (2.0 g/l) Trasferire 50.0 ml di questa soluzione in un pallone da 25 ml e diluire al volume con H2O. Agitare e lasciare stratificare la fase organica. Prelevare la fase superiore e iniettare
24 Determinazione Sulfentrazone GC/FID Colonna: DB-1 30 m X 0.32 mm; Flusso: 0.4 ml/min Temperatura colonna: 50 C; Hold: 2 min, rate: 25 C/min, final: 200 C, hold 3 min; rate: 30 C/min Volume iniettato: 1 ml
25 Determinazione Atrazina MT 91 Pesare una quantità di campione corrispondente a 50 mg di atrazina in un pallone da 25 ml. Diluire con una soluzione di Dieldrin in CH3CN/H2O (50/50, v/v) (2.0 g/l) Diluire una porzione in CH3CN/H2O (6+4, v+v) agitare. Filtrare un aliquota su anotop da 0.2 mm e iniettare
26 Determinazione Atrazina GC/FID Colonna: DB-1 30 m X 0.32 mm; 0.25 mm Flusso: 0.4 ml/min Temperatura colonna: 50 C; Hold: 2 min, rate: 25 C/min, final: 200 C, hold 3 min; rate: 30 C/min Volume iniettato: 1 ml
27 Determinazione Acetamiprid MT 649 Pesare una quantità di campione corrispondente a 100 mg di acetamiprid in un pallone da 100 ml. Diluire con 20 ml di Cumarina (30 mg/ml), portare a volume. Filtrare un aliquota su anotop da 0.2 mm e iniettare
28 Determinazione Acetamiprid MT 649 HPLC/DAD Colonna: Zorbax SB C mm X 4.6 mm; 5 mm Fase mobile: CH3CN/H2O acidificata con H3PO4 10% Isocratica Flusso: 1.0 ml/min Temperatura colonna: 40 C Volume iniettato: 5 ml DAD: 246 nm
29 Determinazione Penoxulam Pesare una quantità di campione circa 10 g in un pallone da 50 ml. Dissolvere con H2O/CH3OH (20:80, v/v). Filtrare un aliquota su anotop da 0.2 mm e iniettare
30 Determinazione Penoxulam HPLC/DAD Colonna: Zorbax SB c mm X 4.6 mm; 5 mm Fase mobile: CH3CN/H2O acidificata con CH3COOH 1% Isocratica Flusso: 1.5 ml/min Temperatura colonna: 25 C Volume iniettato: 10 ml DAD: 280 nm
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