Determinazione simultanea di sostanze psicotrope su XevoTQD tramite metodo rapido dopo preparazione del campione con reattivo M3. LSP - marzo

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1 Determinazione simultanea di sostanze psicotrope su XevoTQD tramite metodo rapido dopo preparazione del campione con reattivo M3 1

2 Attività di ricerca e dosaggio SOSTANZE STUPEFACENTI e PSICOTROPE INDICATORI BIOLOGICI DI ESPOSIZIONE PROFESSIONALE ELEMENTI IN TRACCIA FARMACI 2

3 COMMITTENTI LSP-TN U.O. di MEDICINA LEGALE FORZE dell ORDINE NUCLEO MEDICO COMPETENTE e MEDICI del LAVORO NUCLEO OPERATIVO ANTIDROGA U.O. OSPEDALIERE (PS, reparti, laboratorio, anatomia patologica, ) SerT CARCERI PRIVATI 3

4 FINALITA DELLE INDAGINI TOSSICOLOGICHE VERIFICA MONITORAGGIO CONTROLLO CLINICO FORENSE MEDICO-LEGALE SOSTANZE STUPEFACENTI ESPOSIZIONE PROFESSIONALE ELEMENTI IN TRACCIA FARMACI SOSTANZE STUPEFACENTI ELEMENTI IN TRACCIA FARMACI ALTRE SOSTANZE 4

5 INDAGINI TOSSICOLOGICHE per ricerca SOSTANZE STUPEFACENTI VERIFICA - MONITORAGGIO CONTROLLO CLINICO valutazione dell uso di sostanze stupefacenti valutazione dello stato di dipendenza del soggetto, in termini di cessazione o riduzione di uso di sostanze d abuso monitoraggio nella sindrome da dipendenza verifica della storia d uso e abuso di sostanze stupefacenti controllo della compliance a trattamenti farmacologici follow up a lungo termine in pazienti dimessi da Servizi per le Tossicodipendenze VALORE MEDICO-LEGALE o FORENSE accertamenti medico/legali accertamento di responsabilità in incidenti stradali valutazione di inidoneità alla guida valutazione di inidoneità lavorativa accertamenti in caso di intossicazione acuta accertamenti post mortem rilascio autorizzazione per il porto d armi affidamento, custodia minori discriminazione tra utilizzo e cessione ad altri di droghe 5

6 MATRICI OGGETTO DI INDAGINE URINA SANGUE/SIERO FORMAZIONI CHERATINICHE SOSTANZE STUPEFACENTI ETANOLO ETIL-GLUCURONIDE METABOLITI DI FARMACI MARCATORI di ESPOSIZIONE PROFESSIONALE ELEMENTI in TRACCIA SOSTANZE STUPEFACENTI ETANOLO FARMACI ELEMENTI in TRACCIA SOSTANZE STUPEFACENTI ETIL-GLUCURONIDE (METABOLITA dell Etanolo) FLUIDO ORALE SOSTANZE STUPEFACENTI CONTENUTO GASTRICO BILE ALTRI FLUIDI BIOLOGICI SOSTANZE STUPEFACENTI ETANOLO FARMACI LSP ALTRE - marzo SOSTANZE 2013 TOSSICHE (pesticidi, ) 6

7 TEMPO DI RILEVAMENTO DELLE DROGHE NELLE VARIE MATRICI BIOLOGICHE Dopo assunzione ed in funzione delle caratteristiche farmacocinetiche una droga e i suoi metaboliti possono essere rilevati: Sangue Saliva Urina Capelli ore ore giorni mesi 7

8 SCELTA DEL CAMPIONE DA ANALIZZARE IN FUNZIONE DELLA FINALITA DELL ACCERTAMENTO ATTUALITA D USO ASSUNZIONE ABITUALE E/O CRONICA SANGUE SALIVA URINA CAPELLO ABUSO PREGRESSO CAPELLI 8

9 CARATTERISTICHE DELLE TRE MATRICI BIOLOGICHE IN ESAME CARATTERISTICHE URINA SANGUE CAPELLO prelievo disagevole invasivo comodo/non invasivo appartenenza al non sempre certa certa certa soggetto adulterazione possibile impossibile difficile contaminazione passiva difficile impossibile possibile ripetibilità prelievo impossibile impossibile possibile conservazione 4 C/-20 C 4 C/-20 C temp. ambiente trasporto temp. controllata temp. controllata temp. ambiente tecnica analitica * immunoch./cromatogr. immunoch./cromatogr. immunoch./cromatogr. tempo di risposta +/+++ +/+++ +/+++ concentrazione in elevata bassa bassa matrice tipo di misura incremento incremento cumulativo finestra di rilevazione 2/3 giorni ore mesi/anni 9

10 CONCENTRAZIONI SOGLIA (CUT-OFF) PER LA POSITIVITA - ANALISI DI CONFERMA CLASSE di SOSTANZA/SOSTANZa URINA ng/ml SANGUE ng/ml CAPELLO ng/mg OPPICEI 6-O-MAM Morfina, Codeina COCAINA Cocaina, Benzoilecgonina CANNABINOIDI THC OH-THC 2 THC-COOH AMFETAMINE e analoghi Amfetamine, Metamf MDMA, MDA, MDEA METADONE BUPRENORFINA

11 ATTUALE OFFERTA ANALITICA LSP-TN SOSTANZA ANALISI DI CONFERMA URINA CAPELLO SANGUE INTERO Morfina, 6-MAM, Codeina X X X Cocaina, Benzoilecgonina, Cocaetilene X X X D9-THC X X 11-OH-THC CBN, CBD THC-COOH X X Amfetamine, Metamf., X X X MDMA, MDA, MDEA X X X Benzodiazepine Metadone X X X EDDP X X X Buprenorfina X X X X X X 11

12 URINE Ev.le Idrolisi SPE Evap. a secchezza Iniezione LC/MS QUANTITATIVA Derivatizz.- Iniezione GC/MS QUANTITATIVA SANGUE CANNAB. EXT Liq-Liq Evap. a secch. Derivatizz.- Iniezione GC/MS QUALI-QUANTITATIVA ALTRE DROGHE SPE Evap. a secch. Iniezione LC/MS QUANTITATI VA Derivatizz.- Iniezione GC/MS QUANTITATIVA DOTAZIONE STRUMENTALE Alliance Micromass-ZQ Waters GC/MS-MS 4000 Varian 12

13 CAPELLI DROGHE BASICHE DROGHE ACIDE OPPIACEI ALTRE DROGHE CANNAB. Capello POLVERIZ. Capello SMINUZ. Capello SMINUZ. EXT TAMP 1 notte a 50 C EXT HCL 1 notte a 50 C EXT KOH 30 a 90 C SPE SPE EXT Liq-Liq Evap.a secch. Evap.a secch. Evap.a secch. Iniezione LC/MS QUANTITATIVA Iniezione LC/MS QUANTITATIVA Derivatizzazione Iniezione GC/MS QUALI-QUANTITATIVA Derivatizzazione Iniezione GC/MS QUALI-QUANTITATIVA Derivatizzazione Iniezione GC/MS QUALI-QUANTITATIVA 13

14 MANAGEMENT SANITARIO obiettivi efficacia ed efficienza realizzazione di servizi efficienti ed affidabili gestione razionale di risorse controllo dei processi produttivi innovazione organizzativa e operativa configurazione dell offerta in relazione al bisogno 14

15 AZIONI PREPARAZIONE DEL CAMPIONE (M3) Semplicità Velocità Simultaneità di estrazione Solubilizzazione analiti Stabilizzazione analiti XEVO TQD Metodi cromatografici più veloci Valenza legale del risultato 15

16 XEVO-TQD Metodi base screening MIRATO e INCOGNITO Colonna cromatografica: UPLC HSS C18 Fase mobile: Tampone Ammonio formiato Acetonitrile 16

17 Reattivo M3 COMEDICAL Estrazione simultanea di tutti gli analiti (compreso ETG) Estrazione veloce e semplice (1 ora a 100 C) da capello sminuzzato Nessuna trasformazione degli analiti Solubilizzazione Stabilizzazione Compatibile con iniezioni dirette LC/MS/MS (solubile in acqua..su base acquosa) Velocizzazione nella preparazione della matrice Migliore recupero 17

18 CONFRONTO SOLUBILIZZAZIONE Mix drugs in urina (dil in acqua) / Mix drugs in urina (dil in acqua + 5% M3) 18

19 CONFRONTO SOLUBILIZZAZIONE THC-COOH Mix drugs in urina (dil in acqua) / Mix drugs in urina (dil in acqua + 5% M3) 19

20 NUOVO APPROCCIO OPERATIVO CAPELLI M3 + XEVO TQD TUTTE LE DROGHE VENGONO ESTRATTE CONTEMPORANEAMENTE Opia, Coca, Meth, Amf, Ecs, Ket, Cannabinoidi, Bupren, Benzod, ETG, ecc. Capello SMINUZZATO EXT Reattivo M3 1 ora 100 C Diluizione con acqua Iniezione LC/MS/MS QUALI-QUANTITATIVA 20

21 ng/mg CONFRONTO RECUPERO 6-O-MAM nel capello dopo estrazione con M3/Tampone ph5 6-o-MAM 4,00 REATTIVO M3 Tamp ph5 camp PLV 3,50 0,08 0,08 0,23 0,22 3,00 1,52 1,48 0,35 0,38 2,50 0,61 0,40 0,38 0,41 2,00 REATTIVO M3 3,52 3,63 0,83 0,73 1,50 Tamp ph5 camp PLV 0,33 0,26 1,00 1,12 1,30 0,09 0,08 0,50 0,37 0,30 3,80 2,90 4,00 3,05 0, campioni 21

22 ng/mg BEG REATTIVO M3 HCL 0,1 M 0,04 0,03 0,09 0,10 0,14 0,15 0,43 0,35 CONFRONTO RECUPERO BEG nel capello dopo estrazione con M3/HCl 0.1 M 0,12 0,13 0,24 0,25 0,38 0,32 3,50 0,80 0,69 0,10 0,11 3,00 3,21 2,62 0,05 0,04 0,15 0,12 2,50 0,08 0,07 0,17 0,15 0,03 0,03 0,12 0,11 2,00 1,50 REATTIVO M3 HCL 0,1 M 0,29 0,21 0,10 0,18 1,15 1,40 1,00 0,09 0,09 0,03 0,04 0,50 0,06 0,06 1,18 1,11 0,09 0,10 0,40 0,42 0, campioni 0,19 0,18 1,28 1,40 22

23 ng/mg CONFRONTO RECUPERO THC nel capello dopo estrazione con M3/KOH1 M REATTIVO M3 THC KOH 1 M 2,50 0,12 0,08 0,55 0,47 0,60 0,56 2,00 1,70 1,20 0,23 0,22 0,80 0,61 0,54 0,57 0,04 0,05 0,44 0,49 0,09 0,10 0,10 0,14 2,08 1,38 1,50 1,00 0,50 REATTIVO M3 KOH 1 M 0,64 0,53 0,25 0,20 0,66 0,38 0,58 0,66 0,38 0,42 0, campioni 23

24 CAPELLO in M3 + SCREENING MIRATO WATERS NEGATIVO / POSITIVO 24

25 KETAMINA in MATRICE CHERATINICA calibrazione e quantificazione al cut-off 25

26 THC in MATRICE CHERATINICA calibrazione e quantificazione 2 cut-off 26

27 THC-COOH in MATRICE CHERATINICA sperimentale 27

28 ESTENSIONE DEL METODO A NUOVE MOLECOLE

29 ETG in MATRICE CHERATINICA calibrazione e quantificazione al cut-off 29

30 DROGHE BASICHE CAPELLI DROGHE ACIDE CAPELLI M3 +XEVO TQD OPPIACEI ALTRE DROGHE CANNAB. TUTTE LE DROGHE Capello POLVERIZ. Capello SMINUZ. Capello SMINUZ. Capello SMINUZ. EXT TAMP 1 notte a 50 C EXT HCL 1 notte a 50 C EXT KOH 30 a 90 C EXT Reattivo M3 1 ora 100 C SPE SPE EXT Liq-Liq Diluizione con acqua Evap.a secch. Evap.a secch. Evap.a secch. Iniezione LC/MS QUANTITATIVA Iniezione LC/MS QUANTITATIVA Derivatizzazione Iniezione GC/MS QUALI-QUANTITATIVA Derivatizzazione Iniezione GC/MS QUALI-QUANTITATIVA Derivatizzazione Iniezione GC/MS QUALI-QUANTITATIVA Iniezione LC/MS/MS XEVO TQD QUALI-QUANTITATIVA 30

31 SANGUE INTERO in M3 + SCREENING MIRATO WATERS NEGATIVO / POSITIVO 31

32 BENZOILECONINA NEL SANGUE INTERO 32

33 6-O-MAM NEL SANGUE INTERO 33

34 MDMA NEL SANGUE INTERO 34

35 URINE Ev.le Idrolisi SPE Evap. a secchezza Iniezione LC/MS QUANTITATIVA URINE Ev.le Idrolisi Diluizione con acqua/m3. Iniezione LC/MS QUANTITATIVA SANGUE CANNAB. EXT Liq-Liq Evap. a secch. Derivatizz.- Iniezione GC/MS QUALI-QUANTITATIVA ALTRE DROGHE SPE Evap. a secch. Iniezione LC/MS QUANTITATIVA Derivatizz.- Iniezione GC/MS QUANTITATIVA SANGUE Precipitazione + (M3) Iniezione LC/MS QUANTITATIVA 35

36 Già eseguite VEQ con questi nuovi metodi con esito favorevole Notevole riduzione della manualità e della manipolazione della matrice con conseguente diminuzione della possibilità di errore e dell incertezza di misura Estrema semplicità analitica con matrici complesse Aumento della produttività 36

37 PROGRAMMAZIONE SEDUTA ANALITICA 37

38 38

39 NUOVA OFFERTA ANALITICA LSP-TN SOSTANZA ANALISI DI CONFERMA URINA CAPELLO SANGUE INTERO Morfina, 6-MAM, Codeina, Diidrocod. X X X Cocaina, Benzoilecgonina, Cocaetilene X X X D9-THC X X 11-OH-THC CBN, CBD X X THC-COOH X X X Amfetamina, Metamfetamina X X X MDMA, MDA, MDEA X X X Benzodiazepine Metadone X X X EDDP X X X Buprenorfina X X X KETAMINA X X X ETILGLUCURONIDE X X X CATINONI X X X CANNABINOIDI SINTETICI X X X X 39

40 PROGETTI FUTURI Scelta definitiva della colonna cromatografica ottimale Validazione dei metodi Sperimentare il pretrattamento del campione on-line tramite cromatografia bidimensionale Inserimento delle molecole emergenti nel pannello degli analiti (catinoni, cannabinoid sintetici, ) Adesione al progetto di Allerta precoce 40

41 GRAZIE PER L ATTENZIONE 41