REPORT DEL RING TEST NAZIONALE PER LA RICERCA DI ANTICORPI NEI CONFRONTI DEL VIRUS DELLA MALATTIA DI AUJESZKY MEDIANTE TECNICA ELISA Anno 2007
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- Severina Ricci
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1 ISTITUTO ZOOPROFILATTICO SPERIMENTALE DELLA LOMBARDIA E DELL'EMILIA ROMAGNA BRUNO UBERTINI (ENTE SANITARIO DI DIRITTO PUBBLICO) BRESCIA Vi Binchi, BRESCIA (Itly) Tel Fx: E-mil: virol@bs.izs.it REPORT DEL RING TEST NAZIONALE PER LA RICERCA DI ANTICORPI NEI CONFRONTI DEL VIRUS DELLA MALATTIA DI AUJESZKY MEDIANTE TECNICA ELISA Anno 2007 CRMA Centro di Referenz Nzionle dell Mltti di Aujeszky-Pseudorbbi IZSLER, Reprto di Virologi e Sierologi Specilizzt, Bresci Responsbile del centro Cordioli dott. Polo, Tel e-mil polo.cordioli@bs.izs.it
2 REPORT DEL RING TEST NAZIONALE PER LA RICERCA DI ANTICORPI NEI CONFRONTI DEL VIRUS DELLA MALATTIA DI AUJESZKY MEDIANTE TECNICA ELISA, nno 2007 Introduzione L mltti di Aujeszky è sostenut dll Herpesvirus suino tipo 1 (SHV-1), per il qule il suino rppresent il reservoir e l unic sorgente d infezione per un mpio rnge di ospiti secondri, domestici e selvtici (fondi ciechi dell infezione), nei quli si osserv, in seguito d infezione, esito costntemente letle. L dignosi di lbortorio dirett prevede diversi pprocci e contempl l impiego dell immunofluorescenz (IF), dell immunoperossidsi (IP), dell istologi e dell immunoistochimic, dell isolmento virle e di metodiche biomolecolri. L dignosi di lbortorio indirett, rppresent il punto crdine per il monitorggio dell mltti e prevede l impiego di metodiche sierologiche clssiche, come l sieroneutrlizzzione e, in prticolre, l ELISA volt d individure nticorpi specifici nei confronti delle glicoproteine virli gb e ge. Con il DM il Ministero dell Snità conferisce ll Istituto Zooprofilttico Sperimentle dell Lombrdi e dell Emili Romgn (IZSLER), sede centrle di Bresci, l funzione di Centro di Referenz Nzionle per l mltti di Aujeszky Pseudorbbi. L Decisione dell Commissione 93/244/CEE (poi brogt e sostituit dll Decisione dell Commissione 2001/618/CE) ffid ll Istituto nche il compito di vlutre sistemi dignostici (Kit ELISA gi) utilizzti in Itli per gli nimli oggetto di scmbi intercomunitri e di produrre e stndrdizzre i sieri di riferimento nzionli, conformemente quelli comunitri. I compiti istituzionli del Centro Nzionle di Referenz per l Mltti di Aujeszky sono quelli definiti nel DM , rt. 2. Tr questi compiti vi è nche quello di orgnizzre circuiti interlbortorio livello nzionle. A tutti i lbortori che hnno derito l Ring test 2007, è stto invito un pnnello di 50 sieri: 26 ottenuti d nimli infettti sperimentlmente 6 ottenuti d nimli vccinti 14 ottenuti d nimli vccinti e successivmente sottoposti d infezione sperimentle 4 ottenuti d suini SPF. I dti ottenuti di singoli lbortori sono stti trsmessi ll Osservtorio Epidemiologico Veterinrio Regione Lombrdi (OEVRL), che h provveduto d ggregrli e nlizzrli. 2
3 Prtecipnti In totle, hnno prtecipto l ring test, 21 lbortori, dislocti su tutto il territorio nzionle. Ad ogni lbortorio è stto ssegnto un numero, conoscenz del lbortorio stesso e utilizzto in questo report. I singoli lbortori sono riportti in tbell 1. Tb. 1 Elenco dei prtecipnti l ring test 2007 IZS Lombrdi, Emili Romgn IZS Mezzogiorno IZS Srdegn IZS Lzio, Toscn IZS Piemonte, Liguri, Vlle d Aost IZS Venezie IZS Umbri, Mrche IZS Abruzzo, Molise IZS Sicili IZS Pugli, Bsilict Prtecipnti Sezione di Mntov Sezione di Prm Sezione di Reggio Emili Sezione di Lodi Sezione di Pvi Sede centrle Npoli, dip. Snità nimle, u.o.s. virologi Sezione di Ctnzro Sede centrle Sssri, lb. Mlttie esotiche Sezione di Cgliri Sede centrle Rom, d.o. mlttie virli e leptospirosi Sede centrle Torino, u.o. virologi e sierologi specilizzt Sezione Cuneo Sede centrle Pdov Sezione di Treviso Sezione di Udine Sede centrle di Perugi, Dignostic Immunologic Are Dignostic Sezione di Fermo Lbortorio Pini di Erdiczione e Sorveglinz Sede centrle di Termo, lbortorio di sierologi Sede centrle, Plermo Sede centrle di Foggi, u.o. virologi Kit ELISA I lbortori hnno utilizzto diversi kit ELISA o diversi lotti dello stesso kit. Sono stti utilizzti 7 diversi kit, in prticolre: PRV gb, kit IZS Bresci (4 lbortori), PRV ge, kit IZS Bresci (3 lbortori), Herdcheck nti-adv gpi ntibody test kit, IDEXX (14 lbortori), Herdcheck PRV gb test kit, IDEXX (3 lbortori), ELISA Aujeszky gb serum Pourquier (4 lbortori), Synbiotics serelis PRV gi Ab Mono Bloking kit (ASPRV1)(2 lbortori), PRV gi kit Bommeli (1 lbortorio). 3
4 Descrizione sieri utilizzti per il ring test nzionle dell mltti di Aujeszky, nno 2007 Il pnnello comprendev 50 sieri, in provette contenenti 0.5 ml di siero, identificte solmente con numeri progressivi d 1 50, corrispondenti i seguenti sieri: - sieri dl n. 1 l n. 6: sieri ottenuti 60 giorni dopo l prim vccinzione d suini SPF vccinti per vi IM con vccino inttivto ge-deleto del commercio, richimti dopo 30 giorni dl primo intervento vccinle - sieri dl n. 7 l n. 10: sieri ottenuti 7 giorni post infezione d suini SPF vccinti per vi IM con vccino inttivto ge-deleto del commercio e successivmente infettti sperimentlmente con TCDI 50 del ceppo ADV75D19 - sieri n. 11 e n. 12: sieri ottenuti 8 giorni post infezione, d suini SPF infettti per vi endonsle con TCDI 50 del ceppo ADV sieri n. 13 e n. 14: sieri ottenuti 19 giorni post infezione, d suini SPF infettti per vi endonsle con TCDI 50 del ceppo ADV sieri n. 15 e n. 16: sieri ottenuti 15 giorni post infezione, d suini SPF infettti per vi endonsle con TCDI 50 del ceppo ADV sieri dl n. 17 l n. 22: sieri ottenuti 30 giorni dopo l ultim vccinzione d suini d suini SPF vccinti per vi IM con vccino inttivto ge-deleto del commercio, vccinti nuovmente dopo 30 giorni dll prim inoculzione ed un terz volt 30 giorni d quest ultim - sieri n. 23 e n. 24: sieri ottenuti 8 giorni post infezione d suini SPF infettti per vi endonsle con TCDI 50 del ceppo vccinle Bucrest - sieri n. 25 e n. 26: sieri ottenuti 10 giorni post infezione d suini SPF infettti per vi endonsle con TCDI 50 del ceppo vccinle Bucrest - sieri n. 27 e n. 28: sieri ottenuti 9 giorni post infezione d suini d suini SPF vccinti per vi IM con vccino inttivto ge-deleto del commercio e successivmente infettti sperimentlmente con TCDI 50 del ceppo ADV75D19 - sieri n. 29 e n. 30: sieri ottenuti 11 giorni post infezione d suini d suini SPF vccinti per vi IM con vccino inttivto ge-deleto del commercio e successivmente infettti sperimentlmente con TCDI 50 del ceppo ADV75D19 - sieri n. 31 e n. 32: sieri ottenuti 13 giorni post infezione, d suini SPF infettti per vi endonsle con TCDI 50 del ceppo ADV sieri n. 33 e n. 34: sieri ottenuti 10 giorni post infezione d suini SPF infettti per vi endonsle con TCDI 50 del ceppo vccinle Bucrest - sieri dl n. 35 l n. 42: sieri ottenuti 19 giorni post infezione, d suini SPF infettti per vi endonsle con TCDI 50 del ceppo ADV7519 4
5 - sieri dl n. 43 l n. 46: sieri ottenuti 20 giorni post infezione, d suini SPF infettti per vi endonsle con TCDI 50 del ceppo ADV sieri dl n. 47 l n. 50: sieri negtivi ottenuti d suini SPF 5
6 Anlisi sttistiche L obiettivo di questo ring test è stto quello di determinre l cpcità dei singoli lbortori di eseguire correttmente un test ELISA specifico per PRV e quindi di individure esttmente sieri negtivi di nimli SPF o sieri positivi di nimli sottoposti d infezione sperimentle oppure sieri di nimli vccinti e infettti sperimentlmente e previmente testti dl lbortorio del Centro di Referenz Nzionle dell Mltti di Aujeszky. Il report è pensto per dre i prtecipnti l possibilità di confrontre i propri risultti con quelli degli ltri lbortori e per vere dti sttistici rigurdo i test ELISA utilizzti sul territorio nzionle. Metodi L vlutzione dell'ccordo dei risultti ottenuti di singoli lbortori prtecipnti l ring test, rispetto i risultti ttesi per i singoli sieri, è stt effettut medinte l stim dell'indice di concordnz di Cohen (detto indice K) (tb. 4). Per ogni lbortorio si è proceduto d orgnizzre i risultti in un tbell 2x2 d cui è stto stimto il vlore di K (IC95%). Medinte un test χ 2 con grdi di libertà uguli l numero di lbortori -1, è stt verifict l'omogeneità delle stime di K tr i lbortori. In cso di ssenz di eterogeneità ( p>0.05) si è proceduto d effetture un stim complessiv del vlore di K (overll k) reltivo ll concordnz dei risultti di tutti i lbortori con i risultti ttesi. I risultti ottenuti sono presentti in form grfic (grfico 1). In ogni grfico è riportto per singolo lbortorio prtecipnte indicto con un codific numeric, il rispettivo vlore di K e l'intervllo di confidenz. L'ultimo vlore di K riportto nel grfico 1 rppresent l'overll K. Risultti e nlisi sttistic dei dti In bse i vlori di cut off indicti dlle diverse ditte produttrici, i risultti ottenuti di lbortori prtecipnti, sono stti espressi in senso qulittivo, ovvero come Positivo, Negtivo e, se previsto, Dubbio (tb. 2, 2,b,c e 3). Nelle tbelle 2 e 3 non vengono riportti i lbortori che non hnno eseguito il test ELISA ge o gb, rispettivmente. Per poter prgonre i dti ottenuti l fine di clcolre l indice K, l espressione Dubbio è stt esclus dll nlisi sttistic dei dti. 6
7 Tb. 2 Esiti lbortori per l ricerc medinte ELISA di Ac nti-ge del PRV Lb-kit Sieri b 7 b 8 9 b c 12 c d N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N 2 N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N 3 N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N 4 N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N 5 N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N 6 N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N 7 D D P D P P P P P P P P P P P P P D D D 8 D D D D P P P P P P P P P D D D D D D D 9 D D D N P P D P D P P P P D N D N N N N 10 D D D D P P D P N P P P P D N D N N D N 11 N N N N N P N N N P P P P N D N N N N N 12 N N N N N P N N N P P P P N N N N N N N 13 P D P P P P P P P P P P P P P P P P P P 14 P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P 15 P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P 16 P D P P P P P P P D P P P P P P P P P P 17 N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N 18 N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N 19 N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N 20 N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N 21 N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N 22 N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N 23 P D D N P P P P P P P P P P D N D D N N 24 P N D D P P P P D D P P P P D D D D D D 25 P N D N P P P P D D P P P P D D N D D D 26 D D D N P P D P D D P P P D D P N D D D 27 P D P P P P P P P P P P P P P P P P P P 28 P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P 29 P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P 30 P P P P P P P P P P P P P P P P P P D P 31 P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P 32 P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P 33 P D P P P P P P P P P P P P P P P P P P 34 P D P P P P P P P P P P P P P P P P P P 35 P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P 36 P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P 37 P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P 38 P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P 39 P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P 40 P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P 41 P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P 42 P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P 43 P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P 44 P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P 45 P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P 46 P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P 47 N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N 48 N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N 49 N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N 50 N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N Legend: : PRV gpi ntibody kit test IDEXX b : PRV ge, kit IZS Bresci c : Synbiotics serelis PRV gi AbMonoBlok kit d : Bommeli PRV gi kit N : negtivo P : positivo D : dubbio 7
8 Tb.3 Esiti lbortori per l ricerc medinte ELISA di Ac nti-gb del PRV Lbkit Sieri 1 g 3 f 4 f 6 g 7 g 8 e 1 P P P P P P P P P P P P 2 P P P P P P P P P P P P 3 P P P P P P P P P P P P 4 P P P P P P P P P P P P 5 P P P P P P P P P P P P 6 P P P P P P P P P P P P 7 P P P P P P P P P P P P 8 P P P P P P P P P P P P 9 P P P P P P P P P P P P 10 P P P P P P P P P P P P 11 P P P P P P P P P P P P 12 P P P P P P P P P P P P 13 P P P P P P P P P P P P 14 P P P P P P P P P P P P 15 P P P P P P P P P P P P 16 P P P P P P P P P P P P 17 P P P P P P P P P P P P 18 P P P P P P P P P P P P 19 P P P P P P P P P P P P 20 P P P P P P P P P P P P 21 P P P P P P P P P P P P 22 P P P P P P P P P P P P 23 P P P P P P P P P P P P 24 P P P P P P P P P P P P 25 P P P P P P P P P P P P 26 P P P P P P P P P P P P 27 P P P P P P P P P P P P 28 P P P P P P P P P P P P 29 P P P P P P P P P P P P 30 P P P P P P P P P P P P 31 P P P P P P P P P P P P 32 P P P P P P P P P P P P 33 P P P P P P P P P P P P 34 P P P P P P P P P P P P 35 P P P P P P P P P P P P 36 P P P P P P P P P P P P 37 P P P P P P P P P P P P 38 P P P P P P P P P P P P 39 P P P P P P P P P P P P 40 P P P P P P P P P P P P 41 P P P P P P P P P P P P 42 P P P P P P P P P P P P 43 P P P P P P P P P P P P 44 P P P P P P P P P P P P 45 P P P P P P P P P P P P 46 P P P P P P P P P P P P 47 N N N N N N N N N N N N 48 N N N N N N N N N N N N 49 N N N N N N N N N N N N 50 N N N N N N N N N N N N 9 g 10 e 13 e 14 f 15 f 19 e Legend: e: PRV gb ntibody kit test IDEXX f : ELISA PRV gb institut Pourquier g : PRV gb, kit IZS Bresci N : negtivo P : positivo D : dubbio 8
9 Tb.2-2b-2c Confronto tr gli esiti dei lbortori, suddivisi per kit impiegto, per l ricerc medinte ELISA di Ac nti-ge del PRV rispettivmente utilizzndo: kit IDEXX, kit IZS_BS, kit Synbiotics. Lb Sieri N N N N N N N N N N N N N N 2 N N N N N N N N N N N N N N 3 N N N N N N N N N N N N N N 4 N N N N N N N N N N N N N N 5 N N N N N N N N N N N N N N 6 N N N N N N N N N N N N N N 7 D D P D P P P P P P P D D D 8 D D D D P P P D D D D D D D 9 D D D N D D P D N D N N N N 10 D D D D D N P D N D N N D N 11 N N N N N N P N D N N N N N 12 N N N N N N P N N N N N N N 13 P D P P P P P P P P P P P P 14 P P P P P P P P P P P P P P 15 P P P P P P P P P P P P P P 16 P D P P P P P P P P P P P P 17 N N N N N N N N N N N N N N 18 N N N N N N N N N N N N N N 19 N N N N N N N N N N N N N N 20 N N N N N N N N N N N N N N 21 N N N N N N N N N N N N N N 22 N N N N N N N N N N N N N N 23 P D D N P P P P D N D D N N 24 P N D D P D P P D D D D D D 25 P N D N P D P P D D N D D D 26 D D D N D D P D D P N D D D 27 P D P P P P P P P P P P P P 28 P P P P P P P P P P P P P P 29 P P P P P P P P P P P P P P 30 P P P P P P P P P P P P D P 31 P P P P P P P P P P P P P P 32 P P P P P P P P P P P P P P 33 P D P P P P P P P P P P P P 34 P D P P P P P P P P P P P P 35 P P P P P P P P P P P P P P 36 P P P P P P P P P P P P P P 37 P P P P P P P P P P P P P P 38 P P P P P P P P P P P P P P 39 P P P P P P P P P P P P P P 40 P P P P P P P P P P P P P P 41 P P P P P P P P P P P P P P 42 P P P P P P P P P P P P P P 43 P P P P P P P P P P P P P P 44 P P P P P P P P P P P P P P 45 P P P P P P P P P P P P P P 46 P P P P P P P P P P P P P P 47 N N N N N N N N N N N N N N 48 N N N N N N N N N N N N N N 49 N N N N N N N N N N N N N N 50 N N N N N N N N N N N N N N Lb Sieri N N N 2 N N N 3 N N N 4 N N N 5 N N N 6 N N N 7 P P P 8 P P P 9 P P P 10 P P P 11 N P N 12 N P N 13 P P P 14 P P P 15 P P P 16 P P P 17 N N N 18 N N N 19 N N N 20 N N N 21 N N N 22 N N N 23 P P P 24 P P P 25 P P P 26 P P P 27 P P P 28 P P P 29 P P P 30 P P P 31 P P P 32 P P P 33 P P P 34 P P P 35 P P P 36 P P P 37 P P P 38 P P P 39 P P P 40 P P P 41 P P P 42 P P P 43 P P P 44 P P P 45 P P P 46 P P P 47 N N N 48 N N N 49 N N N 50 N N N Lb Sieri N N 2 N N 3 N N 4 N N 5 N N 6 N N 7 P P 8 P P 9 P P 10 P P 11 P P 12 P P 13 P P 14 P P 15 P P 16 D P 17 N N 18 N N 19 N N 20 N N 21 N N 22 N N 23 P P 24 D P 25 D P 26 D P 27 P P 28 P P 29 P P 30 P P 31 P P 32 P P 33 P P 34 P P 35 P P 36 P P 37 P P 38 P P 39 P P 40 P P 41 P P 42 P P 43 P P 44 P P 45 P P 46 P P 47 N N 48 N N 49 N N 50 N N Legend: N : negtivo P : positivo D : dubbio 9
10 Interpretzione sttistic dei risultti Per l'interpretzione dei vlori di K si f riferimento ll seguente tbell: Tb. 4 Concordnz dei risultti in relzione ll indice K Indice K < Concordnz tr risultti Scrs/nessun Debole Modert Buon Ottim Rigurdo i risultti del test ELISA per l ricerc degli nticorpi nti-ge, i vlori di concordnz Kpp e i rispettivi intervlli di confidenz l 95% per i singoli lbortori sono riportti in tbell 5 e nel grfico 1. Tb. 5 Vlore di concordnz Kpp e rispettivi intervlli di confidenz l 95% dei singoli lbortori per i risultti dei test ELISA per l ricerc di nticorpi nti-ge Lb Kpp lim inf lim sup 1 0,91 0,69 0,97 2 0,8 0,53 0,92 4 0,9 0,68 0,97 5 0,74 0,47 0,87 6 0,91 0,7 0, , ,91 0,69 0,97 9 0,91 0,7 0, ,91 0,69 0, , ,9 0,68 0, , , ,91 0,69 0, ,86 0,62 0, ,91 0,69 0, ,74 0,48 0, ,81 0,56 0, ,81 0,56 0, ,77 0,52 0,9
11 Grfico 1 Vlore di concordnz Kpp e rispettivi intervlli di confidenz l 95% dei singoli lbortori per i risultti dei test ELISA per l ricerc di nticorpi nti-ge e vlore di overll K. indice di concordnz kpp e intervlli di confidenz l 95% kpp lbortorio overll k Conclusioni e discussione Le differenze dei vlori di K tr i lbortori rigurdo i risultti del test ELISA ge non sono risultte significtive l test di eterogeneità (p>0.05). Dt l'omogeneità degli indici di concordnz K tr i singoli lbortori, il K overll è risultto pri 0.88 ( ). Invece, per qunto rigurd gli esiti del test ELISA per l ricerc di nticorpi nei confronti dell glicoprotein B dei singoli lbortori, l concordnz è del 100% ed il K di overll è risultto pri
RING TEST NAZIONALE PER LA RICERCA DI ANTICORPI NEI CONFRONTI DEL VIRUS DELLA MALATTIA DI AUJESZKY MEDIANTE TECNICA ELISA Anno 2012/2013
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a ento Paganti Non Paganti MUSEI TORINO 4-4 626783 146151 772934-772934 5789338,00 PIEMONTE 4-4 626783 146151 772934-772934 5789338,00 BRESCI 1 1 2 - - - 4841 4841 0,00 MNTOV 2-2 135141 113107 248248 312
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ISTITUTI VISITTORI Tavola 3 - Visitatori e Introiti dei Musei, Monumenti ed ree rcheologiche Statali per tipologia e provincia Paganti Non Paganti MUSEI TORINO 2-2 810585 355705 1166290-1166290 7946627,00
Rilevazione 2013 * MUSEI, MONUMENTI E AREE ARCHEOLOGICHE STATALI
a ento Paganti Non Paganti MUSEI TORINO 4-4 267221 286875 554096-554096 1703587,30 PIEMONTE 4-4 267221 286875 554096-554096 1703587,30 BRESCI - 1 1 - - - 4595 4595 0,00 MNTOV 1 1 2 80108 83487 163595 11835
MUSEI, MONUMENTI E AREE ARCHEOLOGICHE. Tavola 3 - Visitatori e Introiti dei Musei, Monumenti ed Aree Archeologiche Statali per tipologia e provincia
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