Il reagente di dosaggio contiene virus HAV inattivato tramite formalina. Trattare come potenzialmente infettivo.

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1 ISTRUZIONI PER L USO VITROS Immunodiagnostic Products Confezione dei reagenti anti-hav Total HAV T Impiego Per la misura qualitativa in vitro di anticorpi del virus umano dell epatite A (anti-hav) nel siero e nel plasma umani (EDTA, eparina o citrato). Compendio e spiegazione del dosaggio L infezione da virus dell epatite A (HAV) è causa di stati patologici e di costi socio-economici in molte parti del mondo 1, 2 La trasmissione avviene solitamente per via fecale-orale, in presenza di acqua o cibo infetti 1, 2, 3. Nelle zone in cui le condizioni igieniche generali sono scarse, il contagio avviene spesso in tenera età. Se contratta nell infanzia, l infezione HAV è generalmente leggera o asintomatica e dà luogo ad un immunità permanente. Grazie al miglioramento delle condizioni igieniche generali, le infezioni avvengono in età più tarda con conseguente aumento del numero di adolescenti ed adulti esposti al virus. Tra gli adolescenti e gli adulti, l infezione HAV è più grave e provoca epatiti con un tasso di mortalità più elevato 4. Durante la fase acuta della malattia, l anti-hav IgM è rilevabile, mentre l anti-hav IgG può essere presente per molti anni dopo la guarigione 1, 2, 4. La presenza dell anti-hav (IgG o IgM) nel siero o nel plasma umani è indicativo di un infezione passata o presente ad opera del virus dell epatite A (HAV) o della vaccinazione contro il virus HAV. Il test dell anti-hav Total è principalmente impiegato per determinare l esposizione all HAV, sia per via naturale che tramite vaccinazione. Principi della procedura Il dosaggio Anti-HAV Total VITROS viene effettuato utilizzando la confezione di reagenti Anti-HAV Total VITROS ed il calibratore Anti-HAV Total per prodotti immunodiagnostici sul sistema immunodiagnostico VITROS. Viene utilizzata una tecnica di immunosaggio competitiva, che prevede la pre-incubazione dell anti-hav nel campione con l antigene HAV nel reagente di dosaggio, seguita dall incubazione con un reagente coniugato contenente anticorpo anti-hav monoclonale biotinilato di ratto ed anticorpo anti-hav monoclonale di ratto marcato con perossidasi di rafano (HRP). Il complesso immune viene catturato dalla streptavidina presente nei pozzetti, mentre il materiale non legato viene rimosso mediante lavaggio. Il coniugato HRP legato viene misurato da una reazione luminescente 5. Un reagente contenente substrati luminogenici (derivato del luminolo e sale peracido) ed un agente di trasferimento di elettroni, viene aggiunto ai pozzetti. L HRP presente nel coniugato legato catalizza l ossidazione del derivato del luminolo, producendo luce. L agente di trasferimento degli elettroni (acetanilide sostituito) aumenta il livello di luce prodotto, prolungandone altresì l emissione. I segnali luminosi vengono letti dal sistema VITROS. Il quantitativo di coniugato HRP legato è inversamente proporzionale alla concentrazione di anti-hav presente. Avvertenze e precauzioni Solo per uso diagnostico in vitro AVVERTENZA: Materiale Potenzialmente Infettivo Il reagente di dosaggio contiene virus HAV inattivato tramite formalina. Trattare come potenzialmente infettivo. Il calibratore Anti-HAV Total VITROS contiene plasma umano positivo e negativo all anti-hav proveniente da donatori sottoposti a test individuali e risultati negativi all antigene di superficie dell epatite B, agli anticorpi del virus dell immunodeficienza umana (HIV 1+2) e al virus dell epatite C (HCV) tramite metodiche approvate (immunosaggi enzimatici). Trattare come materiale infettivo. Versione 1.0 Pubb. n. GEM1235_IT 1

2 HAV T ISTRUZIONI PER L USO Materiali forniti Si raccomanda di usare la dovuta cautela nella manipolazione di materiali di origine umana. Tutti i campioni sono da considerare come potenziale fonte di infezione. Nessun metodo sperimentale può garantire con assoluta certezza l assenza del virus dell epatite di tipo B, dell HCV, dell HIV 1+2 o di altri agenti infettivi. Campioni e componenti del dosaggio devono essere manipolati, conservati ed eliminati in forma solida o liquida in conformità alle procedure dettate dalle relative direttive e normative nazionali in materia di sicurezza biologica (per es. Direttiva M29 del NCCLS) 6. AVVERTENZA: Contiene ProClin 300 Il reagente di dosaggio ed il reagente coniugato contengono ProClin 300. R43: Può provocare sensibilizzazione per contatto con la pelle. R36/38: Irritante per gli occhi e la pelle. S23: Non respirare i vapori o aerosol. S24/25: Evitare il contatto con gli occhi e con la pelle. Materiali forniti 1 confezione dei reagenti contenente: 100 pozzetti rivestiti (streptavidina (fonte, batterica), legante 3 ng biotina/pozzetto). 8,7 ml di reagente di dosaggio (antigene HAV inattivato 2-20 mg/ml) in soluzione tampone con siero di ratto ed agente antimicrobico. 12,0 ml di reagente coniugato (anti-hav monoclonale di ratto marcato con HRP 1,5 µg/ml) ed anti-hav monoclonale di ratto-biotina 1,5 µg/ml) in soluzione tampone con agente antimicrobico. NOTA: Contiene albumina di siero bovino. Materiali richiesti, ma non forniti Sistema immunodiagnostico VITROS e i seguenti prodotti immunodiagnostici VITROS: calibratore per anti-hav Total (comprese scheda di calibrazione lotti e scheda dei protocolli), reagente di segnale, reagente di lavaggio universale, diluente per campioni ad elevata concentrazione B (optional), contenitore per la conservazione delle confezioni di reagenti (optional) con essiccante. Preparazione e conservazione dei reagenti La confezione dei reagenti viene fornita pronta per l uso. Conservare i reagenti in condizioni integre a 2-8 C. Non congelare. Una volta aperta, utilizzare la confezione dei reagenti entro 12 settimane dal primo caricamento sul sistema. Non usare oltre la data di scadenza. Conservare le confezioni di reagenti aperte direttamente sul sistema o a 2-8 C in apposito contenitore ermetico per la conservazione delle confezioni di reagenti sigillati con essiccante a secco. Il calibratore anti-hav Total VITROS viene fornito pronto per l uso. Conservare i reagenti in condizioni integre a 2-8 C. Non usare oltre la data di scadenza. Dopo l apertura, conservare per un massimo di 13 settimane a 2-8 C oppure di 13settimane a -20 C (è ammesso un solo ciclo di congelamento-scongelamento). Preparazione del paziente Non è necessaria alcuna preparazione specifica del paziente. Raccolta, preparazione e conservazione dei campioni Si possono utilizzare campioni di siero o plasma (EDTA, eparina e citrato). I risultati ottenuti con campioni di plasma (citrato) saranno proporzionalmente superiori a causa della diluizione con anticoagulante liquido. Raccogliere i campioni ematici con procedure standard. I campioni di siero e plasma possono essere conservati per un massimo di 5giorni a 2-8 C o di 4 settimane a -20 C. Evitare i cicli ripetuti di congelamento/scongelamento. Si è riscontrato che alcuni dispositivi di prelievo del campione biologico hanno determinato alterazioni all integrità di determinati analiti provocando interferenze nella determinazione analitica 7. Considerata la varietà di dispositivi per la raccolta dei campioni disponibili in commercio, la Ortho-Clinical Diagnostics non è in grado di definire con assoluta certezza le prestazioni dei propri prodotti con tutti i diversi dispositivi. Si raccomanda pertanto che i singoli utilizzatori verifichino che il sistema di prelievo da loro adottato venga usato nel rispetto delle istruzioni della Casa produttrice e sia compatibile con il sistema VITROS. 2 Pubb. n. GEM1235_IT Versione 1.0

3 ISTRUZIONI PER L USO Note sul controllo di qualità e sulla procedura HAV T Note sul controllo di qualità e sulla procedura Manipolare la confezione dei reagenti con cura, evitando: la formazione di condensa sulla scatola, la formazione di schiuma nei reagenti, di agitare la scatola stessa. La calibrazione è specifica per i singoli lotti; le confezioni di reagenti e i calibratori vengono associati in base al numero del lotto. Le confezioni di reagenti dello stesso lotto possono utilizzare la medesima calibrazione, che dev essere effettuata con un calibratore aventi lo stesso numero di lotto. Mescolare perfettamente i campioni, i calibratori e i controlli per inversione e portarli a C prima dell uso. Il calibratore anti-hav Total VITROS viene automaticamente dosato in duplicato. Manipolare i campioni, i calibratori e i controlli in contenitori chiusi al fine di evitare contaminazione ed evaporazione. Per evitare l evaporazione, limitare il numero di campioni, calibratori e controlli presenti sul sistema VITROS. Per maggiori informazioni vedere la Guida dell operatore del sistema VITROS. Riportarli a 2-8 C quanto prima dopo l uso oppure caricare soltanto un quantitativo sufficiente per un singolo impiego. Il calibratore può essere suddiviso in aliquote in contenitori diversi, che devono essere identificati mediante le etichette con codice a barre fornite in dotazione. Verificare periodicamente il materiale a disposizione assicurando la corretta gestione dei reagenti e la disponibilità di lotti di reagenti di Segnale, Reagenti di Lavaggio Universale e Reagenti calibrati sufficienti a condurre le analisi programmate. Dovendo eseguire una serie di dosaggi su un singolo campione, è opportuno accertarsi che il volume di campione sia sufficiente ad effettuare i dosaggi richiesti. La buona prassi di laboratorio richiede l esecuzione di controlli per la verifica delle prestazioni del saggio. Sono disponibili 2 controlli Anti-HAV Total VITROS (Anti-HAV negativo e Anti-HAV positivo). Si raccomanda di eseguire i controlli contestualmente ad una calibrazione e, successivamente, almeno una volta ogni 24 ore e dopo l esecuzione delle procedure di controllo previste (Cfr. la Guida dell operatore del sistema VITROS). Se le procedure di controllo di qualità interne richiedono un uso più frequente dei controlli, è opportuno attenersi alle procedure previste. Per maggiori informazioni vedere la Guida dell operatore del sistema VITROS. Il nome predefinito del dosaggio che appare sul referto del paziente è Anti-HAV Total. L abbreviazione predefinita che appare sui menu di selezione dei dosaggi e sui referti di laboratorio è HAV T. Se necessario è possibile riconfigurare questi valori predefiniti dalla videata di configurazione degli analiti nelle Opzioni e Configurazioni. Accade di rado che campioni di pazienti mostrino rapporti di risultato elevati, superiori alla normale popolazione negativa, e possano essere negativi o positivi all anti-hav. I risultati di questi campioni sono contraddistinti da Retest? e possono essere risolti diluendo il campione 1 in 20 con il diluente per campioni ad elevata concentrazione e ripetendo poi il dosaggio. Fare riferimento alle istruzioni per l uso del diluente per campioni ad elevata concentrazione B. Procedura Il dosaggio per Anti-HAV Total VITROS richiede 10 µl di campione, calibratore o controllo per una determinazione singola, indipendentemente dal volume minimo di riempimento del contenitore per campioni utilizzato. Il dosaggio per anti-hav Total VITROS deve essere calibrato ogni volta si usi un nuovo lotto di reagenti e, successivamente, ad intervalli di 28 giorni. Il dosaggio per anti-hav Total VITROS deve essere calibrato anche dopo l esecuzione di alcune procedure di controllo oppure se i risultati del controllo qualità differiscono molto dal range accettabile. Per informazioni più dettagliate sul funzionamento del sistema si veda la Guida dell Operatore del Sistema immunodiagnostico VITROS, capitoli 4-7. In breve: 1. Effettuare la scansione della scheda dei protocolli per caricare un nuovo protocollo di analisi sul sistema. A questo punto viene visualizzato il pulsante relativo alle diverse determinazioni sulla videata di programmazione dei campioni. Effettuare la scansione della scheda di calibrazione dei lotti per ogni nuovo lotto di reagenti per immettere i dati di scadenza e di calibrazione specifici per quel lotto. 2. Aprire la busta e prelevare la confezione dei reagenti. Caricare la confezione sull unità di autocaricamento o utilizzare il pulsante di scarico/carico nella videata di gestione dei reagenti (visualizzazione per reagente). NOTA: Non utilizzare prodotti danneggiati o non sigillati perfettamente. 3. Caricare i campioni nei settori portacampioni universali usando, se necessario, appositi adattatori (volendo, si possono identificare i campioni con codici a barre). Collocare un puntale monouso accanto ai singoli campioni e caricare i settori sul sistema. Definire i programmi dei campioni tramite la videata di programmazione dei campioni. Avviare la funzione di campionamento. Tutte le fasi di campionamento vengono effettuate automaticamente. 4. Analizzare il calibratore come se si trattasse di campioni (caricare un quantitativo sufficiente per la misura automatica in duplicato). Se si usano etichette con codici a barre non occorre programmare la calibrazione; la calibrazione verrà effettuata automaticamente. Versione 1.0 Pubb. n. GEM1235_IT 3

4 HAV T ISTRUZIONI PER L USO Risultati Risultati I risultati sono calcolati come un segnale normalizzato, relativo ad un valore di cut-off. Durante la procedura di calibrazione viene utilizzato un parametro specifico del lotto, codificato sulla scheda di calibrazione dei lotti, ai fini della determinazione di un valore di cut-off memorizzato valido per il sistema. Per maggiori informazioni leggere le istruzioni per l uso dei calibratori. I risultati vengono calcolati automaticamente dal Sistema VITROS. Risultato = Segnale per il campione di prova Valore di cut-off Un risultato <0,8 sarà contrassegnato come Anticorpo Pos, ad indicare un campione reattivo e la presenza dell anti-hav. Un risultato 0,8 e <1,0 sarà contrassegnato come Borderline, ad indicare un campione borderline. Un risultato 1,0 e <4,0 sarà contrassegnato come Anticorpo Neg, ad indicare un campione non reattivo, negativo all anti- HAV. Un risultato 4,0 sarà contrassegnato come Retest?, ad indicare un campione che deve essere diluito e nuovamente analizzato. Controllo di qualità I risultati delle calibrazione vengono valutati a fronte di due parametri di qualità secondo quanto indicato nella Visualizzazione dei parametri di calibrazione, cui si accede dalla videata Opzioni e configurazione - Revisione/Calibrazioni dell utente. Il mancato rispetto dei parametri di qualità definiti viene codificato nel rapporto di calibrazione. Per le azioni da mettere in atto in seguito ad una calibrazione non andata a buon fine, vedere la Guida dell operatore, capitolo 8, Revisione dei risultati. I valori del campione dei pazienti vengono identificati come Anticorpo Neg, Borderline, Anticorpo Pos o Retest?. I valori di controllo vengono contrassegnati da un codice se la DS 2 rispetto alla media di baseline definita. La qualità della calibrazione non può essere descritta appieno da un singolo parametro. Il rapporto di calibrazione dev essere utilizzato in abbinamento a valori di controllo ai fini della determinazione della validità della calibrazione. Se i risultati di controllo differiscono di molto dal range accettabile, indagarne la causa prima di decidere se annotare i risultati del paziente. Limiti della procedura I risultati ottenuti con questo o altri kit diagnostici devono essere utilizzati ed interpretati esclusivamente nel contesto del quadro clinico generale. Un risultato negativo non esclude la possibilità di esposizione al virus dell epatite A. Il livello di anticorpi anti-hav può essere inferiore al valore di cut-off nelle infezioni precoci e molti anni dopo il contagio. Gli anticorpi eterofili nei campioni di siero o di plasma possono provocare interferenze negli immunodosaggi 8. Questi anticorpi possono essere presenti nei campioni di sangue provenienti da individui a contatto con animali o che sono stati curati con prodotti derivati da siero animale. I campioni contenenti trioleina (<39,9 mmol/l), emoglobina (<1,25 g/l) o bilirubina (<0,342 mmol/l) non interferiscono con l interpretazione clinica dei risultati. Non usare campioni torbidi. I livelli di biotina nel siero restano elevati fino a 24 ore in seguito a somministrazione di biotina per via orale o intravenosa. I campioni contenenti 10 ng di biotina/ml non interferiscono con l interpretazione clinica dei risultati. Interpretazione dei risultati Un risultato negativo indica che l anti-hav (IgG o IgM) non è stato rilevato. Un risultato reattivo indica la presenza dell anti-hav (IgG o IgM). Un campione risultato borderline al dosaggio anti-hav Total VITROS deve essere sottoposto ad ulteriore analisi in duplicato per verificarne lo stato effettivo. Se i risultati del test ripetuto sono <0,80 per entrambi i replicati, il campione deve essere ritenuto reattivo. Se i risultati del test ripetuto sono 1,0 per entrambi i replicati, il campione dev essere ritenuto negativo. Nel caso di risultati ripetutamente borderline, si raccomanda l esecuzione di analisi di follow up. Accade di rado che campioni di pazienti mostrino rapporti di risultato elevati, superiori alla normale popolazione negativa, e possano essere negativi o positivi all anti-hav. I risultati di questi campioni sono contrassegnati come Retest?. Questi campioni devono essere diluiti 1 in 20 nel diluente B per campioni ad elevata concentrazione e nuovamente analizzati. I risultati del campione diluito non devono essere rettificati in base al fattore di diluizione. I risultati dei campioni diluiti sono riportati dal Sistema VITROS come descritto nel paragrafo Risultati e devono essere interpretati come illustrato nel presente paragrafo Interpretazione dei risultati. 4 Pubb. n. GEM1235_IT Versione 1.0

5 ISTRUZIONI PER L USO Prestazioni metodologiche HAV T Prestazioni metodologiche Calibrazione e modalità per ricostruirla La calibrazione del dosaggio anti-hav Total VITROS è ricavabile da un calibratore di riferimento interno che è stato avvalorato al fine di ottimizzare la sensibilità clinica e le specifiche di reattività. Precisione La precisione è stata valutata in conformità al protocollo EP5-T2 9 National Committee for Clinical Laboratory Standards. Due replicati, ciascuno di 4 campioni da pannello sono stati dosati in una singola occasione al giorno per almeno 20 giorni diversi. L esperimento è stato eseguito usando 3 lotti di reagenti differenti su Sistemi differenti. I dati riportati sono rappresentativi delle prestazioni del prodotto. Tabella 1: Precisione Intra-dosaggio Intracalibrazione Intralaboratorio Risultato Rappresentativo DS* VC(%)* DS* VC(%)* DS* VC(%)* 0,99 0,021 2,2 0,041 4,1 0,041 4,1 2,23 0,030 1,3 0,063 2,8 0,072 3,2 0,78 0,015 2,0 0,037 4,8 0,041 5,2 1,21 0,021 1,8 0,041 3,4 0,046 3,8 * Quadratica media Intra-dosaggio: Precisione fra un duplicato e l altro, con media ottenuta su tutti i replicati. Intracalibrazione: Precisione totale, con componenti ponderati di variazione infra-replica e l altra e da un giorno all altro. Intralaboratorio: Misura dell effetto della ricalibrazione sulla precisione totale, calcolata nell ambito di un singolo lotto di reagenti, utilizzando dati di 4 calibrazioni. Sensibilità 538 campioni di pazienti forniti come reattivi all anti-hav Total sono stati analizzati con il dosaggio anti-hav Total VITROS. I campioni discordanti sono stati risolti analizzandoli con dosaggi alternativi disponibili in commercio. Dei 538 campioni forniti come reattivi, 18 sono successivamente risultati veri negativi. Numero di campioni analizzati Inizialmente negativi Ripetutamente negativi Confermati negativi La sensibilità di questo gruppo di campioni analizzati con il dosaggio anti-hav Total VITROS è risultata pari al 99,81% (519/520) (95% CI, da 98,93 % a 99,99 %), in base ai dati risolti. Inoltre, sono stati analizzati 17 pannelli di vaccini disponibili in commercio. Il dosaggio anti-hav Total VITROS ha evidenziato una sensibilità alla sieroconversione post-vaccinazione uguale o superiore per 17/17 pannelli rispetto ai risultati ottenuti con altri dosaggi disponibili in commercio. Specificità 1133 campioni di pazienti indicati come non reattivi all anti-hav Total sono stati analizzati con il dosaggio anti-hav Total VITROS. I campioni discordanti sono stati risolti analizzandoli con dosaggi alternativi disponibili in commercio. Campioni Numero di campioni analizzati Inizialmente reattivi Ripetutamente reattivi Donatore Clinici Totale Confermati positivi La specificità del dosaggio anti-hav Total VITROS per il donatore e i campioni clinici combinati è risultata pari al 99,65% (1123/1127) (95% CI, da 99,09 % a 99,9 %), in base ai dati risolti. Inoltre, sono stati sottoposti a dosaggio Anti-HAV Total VITROS 258 campioni provenienti dai seguenti sottogruppi potenzialmente cross-reattivi: SLE, cirrosi anti-hiv, malattia epatica non virale, anti-hcv, anti-cmv, anti-hsv I & II, anti-ebv, anti-sifilide, anti-rosolia, anti-toxoplasmosi, anti-hbs, anti-htlv, HBsAg, fattore reumatico, gravidanza e anticorpo anti-ratto umano. Nessuna di queste categorie di potenziale cross-reattività è risultata interferire con il dosaggio anti-hav Total VITROS. Versione 1.0 Pubb. n. GEM1235_IT 5

6 HAV T ISTRUZIONI PER L USO Bibliografia Bibliografia 1. Hollinger FB and Ticehurst JR. Hepatitis A virus. Fields Virology 3 rd ed. Philadelphia, Lipincott-Raven, 1996: Stapelton JT and Lemon SM. Hepatits A and hepatitis E. Infectious Diseases, 5 th ed. Philadelphia, Lippincott Co, 1994: Lemon SM. Type A viral heptatitis: epidemiology, diagnosis and prevention. Clinical Chemistry, 1997, 43(8(B)): World Health Organization, Department of Communicable Disease Surveillance and Response: Hepatitis A, WHO/CDS/CSR/EDC/ Summers M et al. Luminogenic Reagent Using 3-Chloro 4-HydroxyAcetanilide to Enhance Peroxidase/Luminol Chemiluminscence, Clin Chem 41: 573 (1995). 6. NCCLS. Protection of laboratory Workers from Instrument biohazards and Infectious Diseases Transmitted by Blood, Body Fluids and tissue; Approved quideline. NCCLS Document M29-A (ISBN ). NCCLS, Wayne, PA 19087; Calam RR. Specimen Processing Separator Gels: An Update, J Clin Immunoassay 11: (1988). 8. Levinson SS. The Nature of Heterophilic Antibodies and Their Role in Immunoassay Interference, J Clin Immunoassay 15: (1992). 9. National Committee for Clinical laboratory Standards. Order Code EP5-T2. (1992). Glossario dei simboli 6 Pubb. n. GEM1235_IT Versione 1.0

7 ISTRUZIONI PER L USO Revisioni HAV T Revisioni Data revisione Versione Modifiche tecniche apportate* Nuovo formato, tecnicamente equivalente a PIGEM1235/100.0 con le seguenti variazioni minori: Sezione Simboli usati sostituita dalla tabella Glossario dei simboli Aggiunta la casella per la firma della sezione Revisioni * Le barre delle modifiche indicano la posizione del testo aggiornato rispetto alla versione precedente del documento. Quando le presenti Istruzioni per l uso saranno sostituite da quelle aggiornate, apporre la propria firma e la data e conservare in base alle direttive locali o ai regolamenti del laboratorio. Firma Data Versione 1.0 Pubb. n. GEM1235_IT 7

8 HAV T ISTRUZIONI PER L USO Condizioni di fornitura: tutte le forniture sono soggette ai termini e alle condizioni di vendita della ditta Ortho-Clinical Diagnostics e dei suoi distributori. Copie di tali condizioni saranno disponibili su richiesta. CHIRON Corporation Emeryville, CA Ortho-Clinical Diagnostics Johnson & Johnson Holmers Farm Way High Wycombe Buckinghamshire HP12 4DP United Kingdom VITROS è un marchio di Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Ortho-Clinical Diagnostics, Inc., Pubb. n. GEM1235_IT Versione 1.0