TSH30. ISTRUZIONI PER L USO VITROS Immunodiagnostic Products Confezione di reagente TSH30

Transcript

1 ISTRUZIONI PER L USO VITROS Immunodiagnostic Products Confezione di reagente TSH30 TSH Impiego Per la misura quantitativa dell ormone tireotropo (TSH) nel siero e nel plasma umani (EDTA o eparina) quale ausilio nella diagnosi differenziale delle patologie tiroidee. Compendio e spiegazione del dosaggio La secrezione di TSH da parte dell ipofisi anteriore è sotto il controllo del fattore di liberazione della tireotropina, un tripeptide prodotto dall ipotalamo. L ormone tireotropo stimola la produzione di tiroxina (T4) e triiodotironina (T3) da parte della tiroide. Le frazioni libere di T4 e T3 in circolazione regolano a turno la secrezione di TSH mediante un meccanismo di feedback negativo all ipofisi e probabilmente all ipotalamo 1. La diagnosi di ipotiroidismo manifesto effettuata rilevando livelli di T4 totale o libera ridotti viene confermata da livelli di TSH accresciuti 2. La misurazione di livelli di TSH ridotti o non rilevabili può contribuire alla diagnosi dell ipertiroidismo 3,4, qualora i livelli di T4 e T3 siano elevati e la secrezione del TSH eliminata. I dosaggi del TSH ad elevata precisione e sensibilità funzionale, che dichiarano livelli di 0,01 0,02 miu/l, sono stati definiti dosaggi di 3a generazione 5. Essi hanno il vantaggio di discriminare tra i livelli di TSH osservati nella tireotossicosi, in confronto ai livelli ridotti, ma rilevabili, che si verificano nell ipertiroidismo subclinico 6. Principi della procedura Il dosaggio TSH30 VITROS viene eseguito mediante la confezione di reagenti TSH30 VITROS e dei calibratori TSH30 per prodotti immunodiagnostici VITROS sul Sistema Immunodiagnostico VITROS. Viene adottata una tecnica immunometrica che implica la reazione simultanea del TSH presente nel campione con l anticorpo coniugato biotinilato (anti-tsh intera monoclonale di ratto) e anticorpo marcato con perossidasi di rafano (HRP) (subunità anti-tsh β monoclonale di ratto). Il complesso antigene-anticorpo viene catturato dalla streptavidina presente nei pozzetti, mentre il materiale non legato viene rimosso mediante lavaggio. Il coniugato HRP legato viene misurato da una reazione luminescente (7). Un reagente contenente substrati luminogenici (derivato del luminolo e sale peracido) ed un agente di trasferimento di elettroni, viene aggiunto ai pozzetti. L HRP presente nel coniugato legato catalizza l ossidazione del derivato del luminolo, producendo luce. L agente di trasferimento degli elettroni (acetanilide sostituito) aumenta il livello di luce prodotto, prolungandone altresì l emissione. I segnali luminosi vengono letti dal Sistema VITROS. Il quantitativo di coniugato HRP legato è direttamente proporzionale alla concentrazione di TSH presente. Avvertenze e precauzioni Solo per uso diagnostico in vitro AVVERTENZA: Materiale potenzialmente infettivo Si raccomanda di usare la dovuta cautela nella manipolazione di materiali di origine umana. Tutti i campioni sono da considerare come potenziale fonte di infezione. Nessun metodo sperimentale può garantire con assoluta certezza l assenza del virus dell epatite di tipo B, del virus dell epatite di tipo C, dell HIV 1+2 o di altri agenti infettivi. Campioni e componenti del dosaggio devono essere manipolati, conservati ed eliminati in forma solida o liquida in conformità alle procedure dettate dalle relative direttive e normative nazionali in materia di sicurezza biologica (per es.direttiva M29 del NCCLS 8 ). AVVERTENZA: Contiene Kathon I reagenti contengono Kathon. R43: Può provocare sensibilizzazione per contatto con la pelle. R52/53: Nocivo per gli organismi acquatici, può provocare a lungo termine effetti negativi per l ambiente acquatico. S24: Evitare il contatto con la pelle. S37: Usare guanti adatti. Versione 1.0 Pubb. n. GEM1002_IT 1

2 TSH30 ISTRUZIONI PER L USO Materiali forniti Materiali forniti 1 confezione dei reagenti contenente: 100 pozzetti rivestiti (streptavidina, legante 3 ng di biotina/pozzetto). 6,2 ml di reagente coniugato (subunità anti-tsh β monoclonale di ratto marcato con HRP, lega 395,6 µiu TSH/mL) in soluzione tampone con agente antimicrobico. 9,1 ml di reagente anticorpo biotilinato (biotina-anti-tsh monoclonale di ratto, lega 131,8 µiu TSH/mL) in soluzione tampone con agente antimicrobico. NOTA: Contiene sieroalbumina bovina e gamma globulina bovina. Materiali richiesti, ma non forniti Sistema immunodiagnostico VITROS e i seguenti prodotti immunodiagnostici VITROS: Calibratori per TSH30 (comprese scheda di calibrazione lotti e scheda dei protocolli), reagente di segnale, reagente di lavaggio universale, diluente per campioni ad elevata concentrazione A, contenitore per la conservazione delle confezioni di reagenti (opzionale) con essiccante. Preparazione e conservazione dei reagenti Le Confezioni di Reagenti per Prodotti Immunodiagnostici VITROS contengono reagenti liquidi omogenei che non devono essere agitati né mescolati prima di essere caricati sul Sistema. Come tutte le soluzioni per dosaggi immunologici a base di proteine, una manipolazione scorretta della confezione di reagente può provocare la formazione di schiuma sulla superficie del reagente stesso. La confezione dei reagenti viene fornita pronta per l uso. Conservare i reagenti in condizioni integre a 2-8 C. Non congelare. Una volta aperta, utilizzare la confezione dei reagenti entro 8 settimane dal primo caricamento sul Sistema. Conservare le confezioni di reagenti aperte direttamente sul Sistema o a 2-8 C in apposito contenitore ermetico per la conservazione delle confezioni di reagenti sigillati con essiccante a secco. I calibratori per TSH30 VITROS vengono forniti pronti per l uso. Conservare i reagenti in condizioni integre a 2-8 C. Non usare oltre la data di scadenza. Dopo l apertura, conservare per un massimo di 13 settimane a 2-8 C o di 13 settimane a -20 C (è ammesso 1 solo ciclo di congelamento-scongelamento). Preparazione del paziente Non è necessaria alcuna preparazione specifica del paziente. Raccolta, preparazione e conservazione dei campioni Si possono usare campioni di siero o plasma (EDTA o eparina). Raccogliere i campioni ematici con procedure standard. I campioni andranno separati completamente da tutto il materiale cellulare. Non farlo può portare a risultati erroneamente elevati. I campioni di siero e plasma possono essere conservati per un massimo di 7 giorni a 2-8 C o 4 settimane a -20 C. Evitare congelamenti e scongelamenti ripetuti. Si è riscontrato che alcuni dispositivi di prelievo del campione biologico hanno determinato alterazioni all integrità di determinati analiti provocando interferenze nella determinazione analitica 9. Considerata la varietà di dispositivi per la raccolta dei campioni disponibili in commercio, la Ortho-Clinical Diagnostics non è in grado di definire con assoluta certezza le prestazioni dei propri prodotti con tutti i diversi dispositivi. Si raccomanda pertanto che i singoli utilizzatori verifichino che il Sistema di prelievo da loro adottato venga usato nel rispetto delle istruzioni della Casa produttrice e sia compatibile con il Sistema VITROS. Note sul controllo di qualità e sulla procedura Manipolare la confezione dei reagenti con cura, evitando: la formazione di condensa sulla scatola, la formazione di schiuma nei reagenti, di agitare la scatola stessa. Se le Confezioni di Reagenti VITROS vengono capovolte o agitate, piccole quantità di schiuma sottile formatasi possono risultare non rilevabili dal Sistema VITROS. Le Confezioni di Reagenti contenenti una schiuma sottile che non viene rilevata possono mostrare un bias negativo. Se dovete utilizzare una confezione di reagente che è stata capovolta o agitata prima che abbia avuto la possibilità di depositarsi, dovrete verificarne le prestazioni eseguendo campioni in duplicato ai fini del controllo qualità dopo aver caricato la confezione sul Sistema. La calibrazione è specifica per i singoli lotti; le confezioni di reagenti e i calibratori vengono associati in base al numero del lotto. Le confezioni di reagenti dello stesso lotto possono utilizzare la medesima calibrazione, che dev essere effettuata con calibratori aventi lo stesso numero di lotto. Mescolare perfettamente i campioni, i calibratori e i controlli per inversione e portarli a C prima dell uso. 2 Pubb. n. GEM1002_IT Versione 1.0

3 ISTRUZIONI PER L USO Procedura TSH30 Manipolare i campioni, i calibratori e i controlli in contenitori chiusi al fine di evitare contaminazione ed evaporazione. Per evitare l evaporazione, limitare il numero di campioni, calibratori e controlli presenti sul Sistema VITROS. Per maggiori informazioni vedere la Guida dell Operatore del Sistema VITROS. Riportare a 2-8 C quanto prima dopo l impiego o caricare soltanto un quantitativo sufficiente ad effettuare una singola analisi. Aliquote di calibratori possono essere trasferite in contenitori alternativi, identificabili tramite codici a barre con le etichette fornite. Verificare periodicamente il materiale a disposizione assicurando la corretta gestione dei reagenti e la disponibilità di lotti di reagenti di Segnale, Reagenti di Lavaggio Universale e Reagenti calibrati sufficienti a condurre le analisi programmate. Dovendo eseguire una serie di dosaggi su un singolo campione, è opportuno accertarsi che il volume di campione sia sufficiente ad effettuare i dosaggi richiesti. La buona prassi di laboratorio richiede l esecuzione di controlli per la verifica delle prestazioni del dosaggio. I controlli Tiroide Totale VITROS o Tiroide Libera VITROS contengono 3 idonei livelli di TSH (bassi, medi, elevati). Si raccomanda di eseguire i controlli contestualmente ad una calibrazione e, successivamente, almeno una volta ogni 24 ore e dopo l esecuzione delle procedure di controllo previste (Cfr. la Guida dell operatore del Sistema VITROS). Se le procedure di controllo di qualità interne richiedono un uso più frequente dei controlli, è opportuno attenersi alle procedure previste. Per maggiori informazioni vedere la Guida dell Operatore del Sistema VITROS. Il nome predefinito del dosaggio che appare sul referto del paziente è TSH30, come anche l abbreviazione predefinita che appare sui menu di selezione dei dosaggi e sui referti di laboratorio. Se necessario è possibile riconfigurare questi valori predefiniti. I risultati possono essere espressi come miu/l o µiu/ml. Tali opzioni sono configurabili dalla videata di configurazione degli analiti nelle Opzioni e Configurazioni. I campioni di siero o plasma (EDTA o eparina) con valori superiori all intervallo di calibrazione possono essere diluiti fino a 1/10 con diluente per campioni ad elevata concentrazione A precedentemente al dosaggio. Fare riferimento al foglietto illustrativo del diluente per campioni ad elevata concentrazione A. Procedura Il dosaggio TSH30 VITROS richiede 80 µl di campione, calibratore o controllo per una determinazione singola, indipendentemente dal volume minimo di riempimento del contenitore per campioni utilizzato. Il dosaggio per TSH30 VITROS dev essere calibrato ogni volta si usi un nuovo lotto di reagenti e, successivamente, ad intervalli di 28 giorni. Il dosaggio per TSH30 VITROS dev essere calibrato anche dopo l esecuzione di alcune procedure di controllo oppure se i risultati del controllo qualità differiscono molto dal range accettabile. Per informazioni più dettagliate sul funzionamento del Sistema si veda la Guida dell Operatore del Sistema immunodiagnostico VITROS, capitoli 4-7. In breve: 1. Effettuare la scansione della scheda dei protocolli per caricare un nuovo protocollo di analisi sul Sistema. A questo punto viene visualizzato il pulsante relativo alle diverse determinazioni sulla videata di programmazione dei campioni. Effettuare la scansione della scheda di calibrazione dei lotti per ogni nuovo lotto di reagenti per immettere i dati di scadenza e di calibrazione specifici per quel lotto. 2. Aprire la busta e prelevare la confezione dei reagenti. Caricare la confezione sull unità di autocaricamento o utilizzare il pulsante di scarico/carico nella videata di gestione dei reagenti (visualizzazione per reagente). Nota: Non utilizzare prodotti danneggiati o non sigillati perfettamente. 3. Caricare i campioni nei settori portacampioni universali usando, se necessario, appositi adattatori (volendo, si possono identificare i campioni con codici a barre). Collocare un puntale monouso accanto ai singoli campioni e caricare i settori sul Sistema. Definire i programmi dei campioni tramite la videata di programmazione dei campioni. Avviare la funzione di campionamento. Tutte le fasi di campionamento vengono effettuate automaticamente. 4. Processare i calibratori analogamente ai campioni. Se si usano etichette con codici a barre non occorre programmare la calibrazione; caricare i calibratori in qualsiasi ordine, la calibrazione verrà effettuata automaticamente. Risultati Per costruire la curva di calibrazione principale codificata sulla scheda di calibrazione dei lotti si usa una funzione di aggiustamento di curva logistica a quattro parametri modificata. Per maggiori informazioni leggere le istruzioni per l uso dei calibratori. I risultati sono calcolati automaticamente dal Sistema VITROS. Versione 1.0 Pubb. n. GEM1002_IT 3

4 TSH30 ISTRUZIONI PER L USO Controllo di qualità Controllo di qualità I risultati di calibrazione sono confrontati con un range di parametri che appaiono in dettaglio nella videata dei parametri di calibrazione alla quale si accede dalle Opzioni e Configurazioni (videata di revisione/calibrazioni utente). Se non sono rispettati tutti i range dei parametri di qualità definiti, sul rapporto di calibrazione appare un codice d identificazione. Per le azioni da mettere in atto in seguito ad una calibrazione non andata a buon fine, vedere la Guida dell operatore, capitolo 8, Revisione dei risultati. I valori dei campioni dei pazienti che non rientrano nell intervallo di riferimento sono identificati con un codice basso o elevato LO o HI. I valori di controllo sono contrassegnati da un codice se la DS 2 rispetto alla media di baseline definita. Non esistono parametri individuali in grado di descrivere completamente la qualità dell aggiustamento della curva. Il rapporto di calibrazione dev essere utilizzato in abbinamento a valori di controllo ai fini della determinazione della validità della calibrazione. Se i risultati di controllo differiscono di molto dal range accettabile, indagarne la causa prima di decidere se annotare i risultati del paziente. Limiti della procedura I risultati ottenuti con questo o altri kit diagnostici devono essere utilizzati ed interpretati esclusivamente nel contesto del quadro clinico generale. Gli anticorpi eterofili nei campioni di siero o di plasma possono provocare interferenze negli immunodosaggi 10. Questi anticorpi possono essere presenti nei campioni di sangue provenienti da individui a contatto con animali, o che sono stati curati con prodotti derivati da siero animale. I risultati che sono contraddittori con le osservazioni cliniche indicano che sono necessari altri test. I campioni contenenti trioleina (33,9 mmol/l), emoglobina (0,310 mmol/l) o bilirubina (0,342 mmol/l) interferiscono con questo dosaggio meno del 10%. Non usare campioni torbidi. I livelli di biotina nel siero restano elevati fino a 24 ore in seguito a somministrazione di biotina per via orale o intravenosa. I campioni contenenti 5 ng di biotina/ml interferiscono in ragione di meno del 10%. Questo dosaggio non è stato eseguito con campioni di neonati. Il dosaggio TSH30 VITROS non presenta alcun decremento improvviso fino a 3,250 miu/l. La presenza di autoanticorpi anti ormoni tiroidei nei campioni può provocare interferenze negli immunodosaggi 11. I risultati che sono contraddittori con le osservazioni cliniche indicano che sono necessari altri test. Valori attesi Ogni laboratorio dovrebbe confermare la validità degli intervalli di rifermento rispetto alla popolazione afferente. Su 525 pazienti eutiroidei, non in trattamento tiroideo, il range di risultati ottenuti è stato 0,302 3,05 miu/l (2,5 e 97,5 percentili), con una mediana di 0,959 miu/l. Tale intervallo di riferimento è da considerarsi indicativo. Su 114 pazienti ipotiroidei considerati, tutti presentavano concentrazioni di TSH >3,05 miu/l. Su 100 pazienti ipertiroidei considerati, tutti presentavano concentrazioni di TSH <0,302 miu/l. Prestazioni metodologiche Calibrazione e modalità per ricostruirla L intervallo di calibrazione del dosaggio TSH30 VITROS è 0-65 miu TSH/L (ricavabile da calibratori di riferimento interni che sono stati avvalorati per essere messi in correlazione con un altro dosaggio disponibile in commercio, con riferimento al 2 Preparato di Riferimento Internazionale 80/558). Diluizione Studi sulla diluizione hanno dimostrato che i campioni con valori superiori all intervallo di calibrazione hanno dato risultati accettabili se diluiti fino a 1/10 con diluente per campioni ad elevata concentrazione A precedentemente al dosaggio. Il recupero medio da tutte le diluizioni è stato il 103,9% con un intervallo di riferimento da 96,5% a 115,6%. Accuratezza Si è ottenuta una correlazione tra il dosaggio TSH30 VITROS e un dosaggio del commercio (X) misurando un pannello di 123 campioni di siero di pazienti appartenenti a diverse categorie cliniche. Il range di campioni utilizzato andava da 0,159-47,8 miu/l con il dosaggio TSH30 VITROS e 0,140 54,9 miu/l con il dosaggio in commercio: Dosaggio TSH30 VITROS = 0,922 x X + 0,090 (miu/l), con coefficiente di correlazione di 0, Pubb. n. GEM1002_IT Versione 1.0

5 ISTRUZIONI PER L USO Bibliografia TSH30 Precisione La precisione è stata valutata in conformità al protocollo EP5-T2 12 National Committee for Clinical Laboratory Standards. Due replicati, ciascuno di 3 sieri di controllo liofilizzati sono stati dosati in 2 diverse determinazione al giorno per 20 giorni diversi. L esperimento è stato eseguito usando 2 lotti di reagenti differenti su Sistemi differenti. I dati riportati sono rappresentativi delle prestazioni del prodotto. Tabella 1: Precisione Concentrazione Giornaliera Intracalibrazione Intralaboratorio tipica miu/l DS* CV(%)* DS* CV(%)* DS* CV(%)* 0,108 0, ,6 0, ,8 0, ,0 1,44 0,0183 1,3 0,0507 3,5 0,0576 4,1 25,3 0,334 1,4 1,14 4,7 1,16 4,6 * Quadratica media Giornaliera: Precisione fra un duplicato e l altro, con media ottenuta su tutti i replicati. Intracalibrazione: Precisione totale, con componenti ponderati di variazione infra-replica, fra una replica e l altra e da un giorno all altro. Intralaboratorio: Misura dell effetto della ricalibrazione sulla precisione totale, calcolata nell ambito di un singolo lotto di reagenti, utilizzando dati di 4 calibrazioni. Sensibilità La sensibilità analitica viene definita come la concentrazione media di 20 replicati più 2 deviazioni standard di un campione che non contiene analita. Tipicamente, la sensibilità del dosaggio TSH30 VITROS è 0,002 miu/l. La sensibilità funzionale viene definita come la concentrazione che corrisponde al 20% del coefficiente di variazione tra un dossagio e l altro rispetto al profilo della dose di precisione 13. La sensibilità funzionale del dosaggio TSH30 VITROS è stata calcolata in un singolo intervallo di calibrazione di 28 giorni. Tipicamente, la sensibilità funzionale è 0,010 miu/l con matrice di siero umano. Specificità I seguenti cross-reagenti potenziali hanno provocato meno del 10% di interferenza nel dosaggio TSH30 VITROS (concentrazioni reali saggiate tra parentesi): hcg ( IU/L), FSH (1 000 IU/L), LH (1 000 IU/L). Bibliografia 1. Evered DC.: Diseases of the Thyroid Gland. Clinics in Endocrinology and Metabolism 3: (1974). 2. Evered DC et al.: Grades of hypothyroidism. British Medical Journal 1: (1973). 3. Caldwell G; et al.: A new strategy for thyroid function testing. Lancet 1: (1985). 4. Kerr DJ & Alexander WD.: Is the TRH test usually unnecessary. Lancet 2: (1984). 5. Spencer CA.: Thyroid profiling for the 1990 s: free T4 estimate or sensitive TSH measurement. Journal of Clinical Immunology 12: (1989). 6. Nicoloff JT & Spencer CA.: The use and misuse of the sensitive thyrotropin assays. Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism 71: (1990). 7. Summers M et al.: Luminogenic Reagent Using 3-Chloro 4-Hydroxy Acetanilide to Enhance Peroxidase/Luminol Chemiluminscence. Clinical Chemistry 41. S73 (1995). 8. NCCLS. Protection of laboratory Workers from Instrument biohazards and Infectious Diseases Transmitted by Blood, Body Fluids and tissue; Approved guideline. NCCLS Document M29-A (ISBN ). NCCLS, Wayne, PA 19087; Calam RR.: Specimen Processing Separator Gels: An Update. J Clin Immunoassay 11: (1988). 10. Levinson SS.: The Nature of Heterophilic Antibodies and Their Role in Immunoassay Interference. J Clin Immunoassay 15: (1992). 11. Keefer JH.: Preanalytical considerations in testing thyroid function. Clinical Chemistry 42: (1996). 12. Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices - Second Edition. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Order Code EP5-T2. (1992). 13. Spencer CA et al. Clin Chem 41: (1995). Versione 1.0 Pubb. n. GEM1002_IT 5

6 TSH30 ISTRUZIONI PER L USO Glossario dei simboli Glossario dei simboli 6 Pubb. n. GEM1002_IT Versione 1.0

7 ISTRUZIONI PER L USO Revisioni TSH30 Revisioni Data revisione Versione Modifiche tecniche apportate* Nuovo formato, tecnicamente equivalente a PIGEM1002/101.0 con le seguenti variazioni minori: Sezione Simboli usati sostituita dalla tabella Glossario dei simboli Aggiunta la casella per la firma della sezione Revisioni * Le barre delle modifiche indicano la posizione del testo aggiornato rispetto alla versione precedente del documento. Quando le presenti Istruzioni per l uso saranno sostituite da quelle aggiornate, apporre la propria firma e la data e conservare in base alle direttive locali o ai regolamenti del laboratorio. Firma Data Versione 1.0 Pubb. n. GEM1002_IT 7

8 TSH30 ISTRUZIONI PER L USO Condizioni di fornitura: tutte le forniture sono soggette ai termini e alle condizioni di vendita della ditta Ortho-Clinical Diagnostics e dei suoi distributori. Copie di tali condizioni saranno disponibili su richiesta. Ortho-Clinical Diagnostics Johnson & Johnson Holmers Farm Way High Wycombe Buckinghamshire HP12 4DP United Kingdom VITROS è un marchio di Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Ortho-Clinical Diagnostics, Inc., Pubb. n. GEM1002_IT Versione 1.0