Impiego Per la misura quantitativa in vitro del cortisolo nel siero, nel plasma (eparina o EDTA) o urina umani.

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1 VITROS Immunodiagnostic Products Confezione dei reagenti isolo Impiego Per la misura quantitativa in vitro del cortisolo nel siero, nel plasma (eparina o EDTA) o urina umani. Compendio e spiegazione del dosaggio I corticosteroidi sono sintetizzati dal colesterolo nelle ghiandole corticosurrenali. Il cortisolo è il principale corticosteroide prodotto e secreto 1 dall uomo. Quest ormone veicola tra l altro il metabolismo degli idrati di carbonio, l equilibrio elettrolitico, la ripartizione dell acqua e l attività immunosuppressiva ed anti infiammatori 2. La secrezione del cortisolo dipende dall integrità dell asse adeno pituitario ipotalamico- (HPA), questo steroide esercita una retroazione negativa sulla propria sintesi tramite questo asse 3. Il dosaggio del cortisolo costituisce quindi un parametro importante quando una disfunzione del HPA è sospettata. Il cortisolo circola in generale legato a delle proteine che sono per lo più delle globuline che legano i cortico steroidi 4. L emivita del cortisolo in circolo è di circa 80 minuti 5, e approssimativamente l 1% viene escreto invariato nell urina. Questa frazione viene denominata cortisolo libero urinario e se la funzione renale è normale, rifletterà il livello del cortisolo non legato a proteine in circolazione. Molti metodi immunologici utilizzati per determinare il cortisolo libero urinario omettono fasi cromatografiche misurando contemporaneamente in tal modo i metaboliti del cortisolo. Dopo la degradazione metabolica, principalmente nel fegato, il cortisolo viene escreto nell urina sotto forma di diidro-derivato e di tetraidro-derivato coniugati all acido glucuronico. Il tasso di cortisolo circolante è normalmente sottoposto ad un ritmo circadiano, con un picco massimo tra le 8 e le 9 del mattino e con valori minimi verso la mezzanotte 5, 6. Questo tasso è abitualmente elevato durante la gravidanza o nei pazienti che seguono un forte trattamento estregenico 4. Concentrazioni anomale di cortisolo possono provenire da stimoli come i traumi, paura, febbre, shock, ipoglicemia o depressione. In caso di patologie che colpiscono l asse adeno pituitario ipotalamico (HPA), possono riscontrarsi livelli elevati o bassi di cortisolo : i tumori pituitari, i tumori ipofisari e quelli secernenti ormone adeno-corticotropo (ACTH) sono spesso associati ad una iperproduzione di cortisolo (Sindrome Cushing) mentre un insufficienza surrenale comporta un'ipoproduzione di cortisolo (malattie di Addison). Principi della procedura Il dosaggio isolo VITROS viene effettuato utilizzando la confezione di reagenti isolo VITROS e dei calibratori isolo VITROS sul Sistema Immunodiagnostico VITROS. Questo dosaggio si effettua tramite tecnica immunometrica per competizione tra il cortisolo presente nel campione e un coniugato di cortisolo marcato con perossidasi di rafano (HRP) per un numero limitato di siti di legame su un anticorpo biotinilato (anticorpo di pecora anti-cortisolo). Il complesso anticorpo-antigene è catturato dalla streptavidina che ricopre le pareti dei pozzetti e le sostanze non legate sono eliminate dal lavaggio. Il coniugato con perossidasi da rafano legato viene misurato mediante reazione luminescente 7. Un reagente contenente substrati luminogenici (derivato del luminolo e sale peracido) ed un agente di trasferimento di elettroni, viene aggiunto ai pozzetti. La perossidasi da rafano nel coniugato legato catalizza l ossidazione del derivato del luminolo, dando origine a produzione di luce. L agente di trasferimento di elettroni (acetanilide sostituita) provoca un aumento del livello di luce prodotta e ne prolunga l emissione. I segnali luminosi vengono letti dal Sistema VITROS. Il quantitativo di coniugato con perossidasi da rafano legato è indirettamente proporzionale alla concentrazione di cortisolo presente. Avvertenze e precauzioni Solo per uso diagnostico in vitro AVVERTENZA: Materiale potenzialmente infettivo Gli emoderivati umani presenti nella confezione e nel calibratore isol VITROS sono stati ottenuti da donatori umani i quali sono stati sottoposti a test individuali usando metodi approvati (immunodosaggio enzimatico) e sono risultati negativi per quanto concerne la presenza dell antigene di superficie dell epatite di tipo B, di anticorpi del virus dell immunodeficienza umana (HIV 1+2) e del virus dell epatite C (HCV). Trattare come materiale infettivo. Versione 1.0 Pubb. n. GEM1401_IT 1

2 Materiali forniti Si raccomanda di usare la dovuta cautela nel maneggiare i campioni di origine umana. Tutti i campioni sono da considerare come potenziale fonte di infezione. Nessun metodo sperimentale può garantire con assoluta certezza l assenza del virus dell epatite di tipo B, HCV, dell HIV 1+2 o di altri agenti infettivi. Campioni e componenti del dosaggio devono essere manipolati, conservati ed eliminati in forma solida o liquida in conformità alle procedure dettate dalle relative direttive e normative nazionali in materia di sicurezza biologica (per es. Direttiva M29 del CLSI 8 ). AVVERTENZA: Contiene Kathon I reagenti contengono Kathon. R43: Può provocare sensibilizzazione per contatto con la pelle. R52/53: Nocivo per gli organismi acquatici, può provocare a lungo termine effetti negativi per l ambiente acquatico. S24: Evitare il contatto con la pelle. S37: Usare guanti adatti. Materiali forniti 1 confezione dei reagenti contenente: 100 pozzetti coattati (fonte streptavidina: batteri; capacità legante 3 ng biotina/pozzetto). 9,1 ml di reagente coniugato (HRP-cortisolo, 100 ng/ml) in soluzione tamponata con plasma e un agente antimicrobico. 9,1 ml di reagente anticorpo biotinilato (fonte anticorpo: pecora, capacità legante 0,719 nmol cortisolo/ml) in soluzione tamponata con agente anti-microbico. NOTA: Contiene sieroalbumina bovina e globulina bovina. Materiali richiesti, ma non forniti nel kit Sistema VITROS per immunodiagnostica oltre ai seguenti prodotti immunodiagnostici VITROS: Calibratori per isolo (comprese scheda di calibrazione lotti e scheda dei protocolli), reagente di segnale, reagente di lavaggio universale, diluente per campioni ad elevata concentrazione B, Diclorometano - grado analitico per l estrazione di campioni di urina, pipette sierologiche in vetro, provette, contenitore per la conservazione delle confezioni di reagenti (opzionale) con essiccante. Preparazione e conservazione dei reagenti La confezione dei reagenti viene fornita pronta per l uso. Conservare i reagenti in condizioni integre a 2-8 C. Non congelare. Una volta aperta, utilizzare la confezione dei reagenti entro 8 settimane dal primo caricamento sul sistema. Non usare oltre la data di scadenza. Conservare le confezioni di reagenti aperte direttamente sul sistema o a 2-8 C in apposito contenitore ermetico per la conservazione delle confezioni di reagenti sigillati con essiccante a secco. I calibratori per isolo VITROS vengono forniti liofilizzati. Conservare i calibratori integri a 2-8 C. Non usare oltre la data di scadenza. Ricostituire con 1 ml di acqua distillata. Dopo la ricostituzione conservare per un massimo di 13 settimane a 2-8 C o di 13 settimane a -20 C (è ammesso un solo ciclo di congelamento-scongelamento). Preparazione del paziente Non è necessaria alcuna preparazione specifica del paziente. Raccolta, preparazione e conservazione dei campioni Si possono usare campioni di siero, plasma (eparina o EDTA) o urina. Per la raccolta dei campioni ematici attenersi a procedure standard. I campioni di siero o plasma possono essere conservati fino ad un massimo di 5 giorni a 2-8 C o di 4 settimane a -20 C. I campioni di urina possono essere conservati fino ad un massimo di 5 giorni a 2-8 C o di 4 settimane a -20 C. Evitare congelamenti e scongelamenti ripetuti. I campioni di urina devono essere estratti con diclorometano prima di procedere all esame degli stessi (vedi Pretrattamento per l Estrazione di campioni di urina). Non aggiungere conservanti ai campioni di urina. Si è riscontrato che alcuni dispositivi di prelievo del campione biologico hanno determinato alterazioni all integrità di determinati analiti provocando interferenze nella determinazione analitica 9. Considerata la varietà di dispositivi per la raccolta dei campioni disponibili in commercio, la Ortho-Clinical Diagnostics non è in grado di definire con assoluta certezza le prestazioni dei propri prodotti con tutti i diversi dispositivi. Si raccomanda pertanto che i singoli utilizzatori verifichino che il sistema di prelievo da loro adottato venga usato nel rispetto delle istruzioni della Casa produttrice e sia compatibile con il sistema VITROS. 2 Pubb. n. GEM1401_IT Versione 1.0

3 Note sul controllo di qualità e sulla procedura Da utilizzare con lotti 1000 e superiori Note sul controllo di qualità e sulla procedura Maneggiare la confezione dei reagenti con cura evitando la formazione di condensa sulla scatola, evitando la formazione di schiuma nei reagenti ed infine cercando di non agitare la scatola stessa. La calibrazione è specifica per i singoli lotti; le confezioni di reagenti e i calibratori vengono associati in base al numero del lotto. Le confezioni di reagenti dello stesso lotto possono utilizzare la medesima calibrazione, che dev essere effettuata con calibratori aventi lo stesso numero di lotto. Mescolare perfettamente i campioni, i calibratori e i controlli per inversione e portarli a C prima dell uso. Manipolare i campioni, i calibratori e i controlli in contenitori chiusi al fine di evitare contaminazione ed evaporazione. Per evitare l evaporazione, limitare il numero di campioni, calibratori e controlli presenti sul sistema VITROS. Per maggiori informazioni vedere la Guida dell Operatore del Sistema VITROS. Dopo l uso, devono essere tempestivamente riportati a 2-8 C. In alternativa è possibile utilizzarne un aliquota sufficiente ad una singola determinazione. Verificare periodicamente il materiale a disposizione assicurando la corretta gestione dei reagenti e la disponibilità di lotti di reagenti di Segnale, Reagenti di Lavaggio Universale e Reagenti calibrati sufficienti a condurre le analisi programmate. Dovendo eseguire una serie di dosaggi su un singolo campione, è opportuno accertarsi che il volume di campione sia sufficiente ad effettuare i dosaggi richiesti. La buona prassi di laboratorio prevede l esecuzione di controlli ai fini della verifica delle prestazioni del dosaggio eseguito. I controlli del metabolismo VITROS contengono 3 idonei livelli di cortisolo (bassi, medi, elevati). Questi controlli possono anche essere esaminati utilizzando il pretrattamento per l estrazione dell urina al fine di verificare le prestazioni del protocollo di estrazione dell urina. Si raccomanda di eseguire i controlli contestualmente ad una calibrazione e, successivamente, almeno una volta ogni 24 ore e dopo l esecuzione delle procedure di controllo previste (Cfr. la Guida dell Operatore del Sistema VITROS). Se le procedure di controllo di qualità interne richiedono un uso più frequente dei controlli, è opportuno attenersi alle procedure previste. Per maggiori informazioni vedere la Guida dell operatore del sistema VITROS. Il nome predefinito del dosaggio che appare sul referto del paziente è isol. L abbreviazione predefinita che appare sui menu di selezione dei dosaggi e sui referti di laboratorio è. Se necessario è possibile riconfigurare. I risultati possono essere espressi come nmol/l o µg/dl. Tali opzioni sono configurabili dalla videata di configurazione degli analiti nelle Opzioni e Configurazioni. I campioni di siero, plasma (eparina o EDTA) con valori superiori all intervallo di calibrazione possono essere diluiti fino a 1/2 con diluente per campioni ad elevata concentrazione B precedentemente al dosaggio. Fare riferimento al foglietto illustrativo del diluente per campioni ad elevata concentrazione B. La diluizione delle urine non è supportata. Procedura Il dosaggio per isolo VITROS richiede 25 µl di campione, calibratore o controllo per una determinazione singola, indipendentemente dal volume minimo di riempimento del contenitore per campioni utilizzato. Il dosaggio per isolo VITROS dev essere calibrato ogni volta si usi un nuovo lotto di reagenti e, successivamente, ad intervalli di 28 giorni. Il dosaggio per isolo VITROS dev essere calibrato anche dopo l esecuzione di alcune procedure di controllo oppure se i risultati del controllo qualità differiscono molto dal range accettabile. Per informazioni più dettagliate sul funzionamento del sistema si veda la Guida dell Operatore del Sistema immunodiagnostico VITROS, capitoli 4-7. In breve: 1. Effettuare la scansione della scheda dei protocolli per caricare un nuovo protocollo di analisi sul sistema a questo punto viene visualizzato il pulsante relativo alle diverse determinazioni sulla videata di programmazione dei campioni. Effettuare la scansione della scheda di calibrazione dei lotti per ogni nuovo lotto di reagenti per immettere i dati di scadenza e di calibrazione specifici per quel lotto. 2. Aprire la busta e prelevare la confezione dei reagenti. Caricare la confezione sull unità di autocaricamento o utilizzare il pulsante di scarico/carico nella videata di gestione dei reagenti (visualizzazione per reagente). NOTA: Non utilizzare prodotti danneggiati o non sigillati perfettamente. 3. Caricare i campioni nei settori portacampioni universali usando, se necessario, appositi adattatori (volendo, si possono identificare i campioni con codici a barre). Collocare un puntale monouso accanto ai singoli campioni e caricare i settori sul sistema. Definire i programmi dei campioni tramite la videata di programmazione dei campioni. Avviare la funzione di campionamento. Tutte le fasi di campionamento vengono effettuate automaticamente. 4. Processare i calibratori analogamente ai campioni. Trasferire un aliquota di ogni calibratore nel contenitore del campione (tenendo conto del volume di riempimento minimo del contenitore), che può essere identificato tramite codice a barre con l etichetta fornita. Non è necessario programmare la calibrazione se si usano etichette con codici a barre. Caricare i calibratori nell ordine voluto: la calibrazione parte automaticamente. Pretrattamento per l estrazione di campioni di urina Per la manipolazione, l uso, la conservazione e l eliminazione del diclorometano, fare riferimento alle istruzioni per l uso fornite dal produttore. 1. Pipettare 250 µl di campione di urina in una provetta di vetro pulita. 2. Aggiungere 1,25 ml di diclorometano raffreddato. 3. Girare per 20 secondi con movimento vorticoso e intermittente, quindi immergere la provetta nel ghiaccio per un minimo di 5 minuti al fine di separare gli strati. Versione 1.0 Pubb. n. GEM1401_IT 3

4 Risultati 4. Togliere lo strato superiore ed eliminarlo. 5. Utilizzare una pipetta sierologica, pipettare 750 µl dello strato organico inferiore in una provetta di vetro pulita. Utilizzare le adeguate tecniche di prelevamento con pipetta per il travaso di solventi organici allo scopo di assicurare un travaso volumetrico accurato dello strato contenente isolo. 6. Far evaporare il solvente facendo passare aria o nitrogeno sopra il liquido. 7. Rimettere in sospensione con 150 µl di Diluente B elevato per Campioni. 8. Travasare l intero volume in un recipiente per microcampioni e dosare con il Sistema Immunodiagnostico VITROS. Nell interpretazione dei risultati non si richiede nessun fattore di correzione per la diluizione del campione. Risultati Per costruire la curva di calibrazione principale codificata sulla scheda di calibrazione dei lotti si usa una funzione di aggiustamento di curva logistica a quattro parametri modificata. Il processo di calibrazione riposiziona la curva di calibrazione principale definendo una curva valida che viene memorizzata per il sistema. Per maggiori informazioni leggere le istruzioni per l uso dei calibratori. I risultati vengono calcolati automaticamente dal Sistema VITROS. Controllo di qualità I risultati di calibrazione vengono confrontati con un range di parametri di che appaiono in dettaglio nella videata dei parametri di calibrazione alla quale si accede dalle Opzioni e Configurazioni (videata di revisione/calibrazioni utente). Se non vengono rispettati tutti i range dei parametri di qualità definiti, sul rapporto di calibrazione appare un codice d identificazione. Per le operazioni da eseguire successivamente ad una calibrazione non andata a buon fine si veda il capitolo 8 della Guida dell Operatore (Revisione dei risultati). I valori dei campioni dei pazienti che non rientrano nell intervallo di riferimento vengono identificati con un codice basso o elevato LO o HI. I valori dei controlli vengono identificati se 2 DS rispetto alla media della linea di base definita. Non esistono parametri individuali in grado di descrivere completamente la qualità dell aggiustamento della curva. Il rapporto di calibrazione dev essere utilizzato in abbinamento a valori di controllo ai fini della determinazione della validità della calibrazione. Se i risultati di controllo differiscono di molto dal range accettabile, indagarne la causa prima di decidere se annotare i risultati del paziente. Limiti della procedura I risultati ottenuti con questo o altri kit diagnostici devono essere utilizzati ed interpretati esclusivamente nel contesto del quadro clinico generale. Gli anticorpi eterofili nei campioni di siero o di plasma possono provocare interferenze negli immunodosaggi 10,11. Questi anticorpi possono essere presenti nei campioni di sangue provenienti da individui a contatto con animali o che sono stati curati con prodotti derivati da siero animale. I risultati che sono contraddittori con le osservazioni cliniche indicano che sono necessari altri test. I campioni contenenti trioleina (33,9 mmol/l), bilirubina (1,71 mmol/l), azide (1,5 mmol/l) o diopirone (3,00 mmol/l) interferiscono con questo dosaggio in ragione di meno del 10%. Non usare campioni torbidi. I livelli di biotina nel siero restano elevati fino a 24 ore dopo somministrazione orale o endovenosa di biotina. I campioni di siero contenenti 10 ng di biotina/ml interferiscono in ragione di meno del 5%. I campioni di urina contenenti ng di biotina/ml interferiscono in ragione di meno del 5%. Non utilizzare campioni emolizzati. È stato dimostrato che materiali come i controlli disponibili in commercio o pannelli di controllo che contengono azidi a concentrazioni superiori o uguali allo 0,05% interferiscono con questo dosaggio. I tassi di cortisolo possono variare rapidamente in seguito a stimoli importanti e seguono un ritmo circadiano, quindi un solo dosaggio di questo ormone costituisce una fonte d informazione limitata e deve quindi accompagnarsi di altri test dell asso ipotalamo-ipofisario (riferirsi al paragrafo Riassunto e principi del dosaggio). I risultati di pazienti che assumono steroidi, in particolare prednisolone, devono essere analizzati con cautela per via di un eventuale reattività crociata con l anticorpo di pecora anti-cortisolo (riferirsi al paragrafo Specificità). Valori attesi Si raccomanda ad ogni laboratorio di stabilire il proprio intervallo di riferimento. A titolo indicativo sono stati determinati i seguenti intervalli. Gli intervalli di riferimento da 123 a 626 nmol/l (100 campioni) e da 46,2 a 389 nmol/l (100 campioni) sono stati ottenuti da sieri di pazienti apparentemente sani prelevati rispettivamente al mattino prima delle e alla sera dopo le 17 00, rispettivamente. Un valore di riferimento normale di cortisolo libero urinario da 35,7 a 669 nmol cortisolo/24 ore (42 campioni) è stato ottenuto da campioni di urina di 24 ore raccolti da pazienti apparentemente sani. 4 Pubb. n. GEM1401_IT Versione 1.0

5 Prestazioni metodologiche Da utilizzare con lotti 1000 e superiori Prestazioni metodologiche Calibrazione e modalità per ricostruirla L intervallo di misura del dosaggio isolo va da 4, nmol cortisolo/l (ricavabile da calibratori di riferimento interni che sono stati avvalorati per essere messi in correlazione con i campioni analizzati mediante gascromatografia/spettrometria di massa, GCMS). Le concentrazioni di cortisolo sono citate in unità di nmol/l or µg/dl. Le conversione tra le unità sono fatte utilizzando la formula seguente: Risultato in nmol cortisolo/l = Risultato in µg/dl x 27,59 Accuratezza Si è ottenuta una correlazione tra il dosaggio isolo VITROS e un dosaggio del commercio (X) misurando un pannello di 214 campioni di pazienti di siero appartenenti a diverse categorie cliniche. Il range di campioni utilizzato andava da 14, nmol/l con dosaggio isolo VITROS a 8, nmol/l con il dosaggio del commercio: Siero: Dosaggio isolo VITROS = 0,986 x X + 14,2 (nmol/l), con coefficiente di correlazione di 0,987. Si è ottenuta una correlazione tra il dosaggio isolo VITROS e un dosaggio del commercio (X) misurando un pannello di 100 campioni di urina di pazienti appartenenti a diverse categorie cliniche. Il range di campioni utilizzato andava da 3, nmol/l con dosaggio isolo VITROS a 12,9-820 nmol/l con il dosaggio del commercio: Urina: Dosaggio isolo VITROS = 0,798 x X - 22,0 (nmol/l), con coefficiente di correlazione di 0,976. Precisione La precisione è stata valutata secondo il protocollo EP5 12 del National Committee for Clinical Laboratory Standards. Due replicati di ciascuno dei 3 sieri di controllo liofilizzati sono stati dosati in 2 differenti occasioni ogni giorno per 20 giorni. Dopo aver effettuato il pretrattamento per l estrazione dell urina, per ogni campione di urina è stato svolto un esperimento identico al fine di valutare la precisione per i campioni di urina. Gli esperimenti sono stati realizzati utilizzando 2 lotti di reagenti su Sistemi diversi. I dati presentati sono rappresentativi delle prestazioni del prodotto. Tabella 1: Precisione Campione Concentrazione Intra-saggio Intra-calibrazione Intra-laboratorio di controllo tipica nmol/l DS* CV (%)* DS* CV (%)* DS* CV (%)* 1 88,9 1,97 2,2 3,71 4,1 3,91 4, ,26 2,2 9,28 3,7 10,3 4, ,4 2,0 29,1 3,9 33,6 4,6 1 (estratto) (estratto) (estratto) * Quadratica media Intra-saggio: Precisione fra un duplica e l altro, con media ottenuta su tutte le repliche (ripetibilità). Intra-calibrazione: Precisione totale, con componenti ponderati di variazione infra-replica, fra una replica e l altra e da un giorno all altro. Intra-laboratorio: Misura dell effetto della ricalibrazione sulla precisione totale, calcolata nell ambito di un singolo lotto di reagenti, utilizzando dati di 5 calibrazioni. Sensibilità La sensibilità analitica viene definita come la concentrazione di 2 deviazioni standard rispetto alla media di un campione che non contiene analiti, dove vengono determinati 20 replicati. La sensibilità del dosaggio isolo VITROS è <3 nmol/l. Il limite di rilevazione (LoD) per il dosaggio del cortisolo VITROS è 2,83 nmol/l (0,10 µg/dl), determinato in conformità con le linee guida del Clinical and Laboratory Standards Institute (conosciuto precedentemente come NCCLS) EP17 13 e in proporzione ai falsi positivi (α) inferiore a 1% e di falsi negativi (ß) inferiore al 1%; basato su 1578 determinazioni, con 214 campioni vuoti e 1364 di basso livello. Il limite del vuoto (LoB) = 0,41 nmol/l (0,01 µg/dl). Il limite di quantificazione (LoQ) è 4,39 nmol/l (0,16 µg/dl) determinato dalla concentrazione più bassa alla quale I requisiti di precisione e accuratezza vengono ancora soddisfatti e che rientrano nell intervallo lineare del dosaggio. Specificità La percentuale di reattività crociata al 50% del legame campione zero è stata del 0,95% per 11-deoxycortisol, 1,03% per corticosterone, 0,13% per cortisone, e 26,8% per prednisolone. La percentuale di reattività crociata a 25 µg/ml per estriolo era di 0,006%; a 50 µg/ml, 0,006% a 50 µg/ml per β-cortol, Prednisone, 0,076%; a 100 µg/ml Testosterone, 0,007%; a 100 µg/ml Progesterone, 0,459%; a 50 µg/ml 17-α-Idrossiprogesterone, 0,553%; a 50 µg/ml Desametasone, 0,244%; a 30 µg/ml 11-Deoxycorticosterone, 0,035%; Tetraidrocortisolo, 0,159%;a 30 µg/ml Fludrocortisone, 3,85%; a 10 µg/ml 11β-Idrossiprogesterone, 2,52%; a 10 µg/ml for 6-α-Metilprednisolone, 5,94%; e non rilevabile per 1 mg/ml Topiramate e 30 µg/ml β-cortolone. Versione 1.0 Pubb. n. GEM1401_IT 5

6 Bibliografia Bibliografia 1. Borth, R.: Problems related to the chemical assay of corticosteroids in human body fluids. Acta Endocrinologica 22: (1956). 2. Harris, GW and Donovan, BT.: The adrenal gland. The Physiological Basis of Medical Practice, edited by OH Best and NB Taylor, 8th edition (1966). 3. James, VHT and Landon, J.: Control of corticosteroid secretion current views and methods of assessment. Recent Advances in Endocrinology, edited by VHT James, 8th edition: (1968). 4. Wagner, RK.: Extracellular and intracellular binding proteins. Properties, discrimination, assay and clinical application. Acta Endocrinologica. Supplement 218, vol.88: 3-73, (1978). 5. Hellman, L. et al.: isol is secreted episodically by normal man. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 30: (1970). 6. Sherman, B., Wysham, C. and Pfohl, B.: Age-related changes in the circadian rhythm of plasma cortisol in man. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 61: (1985). 7. Summers M et al.: Luminogenic Reagent Using 3-Chloro 4-Hydroxy Acetanilide to Enhance Peroxidase/Luminol Chemiluminescence. Clin Chem 41. S73 (1995). 8. CLSI: Protection of laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections; Approved guideline Third Edition. CLSI Document M29-A3 (ISBN ). CLSI, Wayne, PA USA, Calam RR.: Specimen Processing Separator Gels: An Update. J Clin Immunoassay 11: (1988). 10. Levinson, SS.: The Nature of Heterophilic Antibodies and Their Role in Immunoassay Interference. J Clin Immunoassay 15: (1992). 11. Kricka, LJ. Human Anti-Animal Antibody Interferences in Immunological Assays. Clin Chem 45: ; NCCLS: Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline Second Edition. NCCLS Document EP5-A2 (ISBN ) NCCLS, Wayne, PA USA, NCCLS: Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation; Approved Guideline. NCCLS document EP 17-A (IBSN ). NCCLS, Wayne PA USA, Glossario dei simboli 6 Pubb. n. GEM1401_IT Versione 1.0

7 Revisioni Da utilizzare con lotti 1000 e superiori Revisioni Data revisione Versione Modifiche tecniche apportate* Nuovo formato, tecnicamente equivalente a PIGEM1401/100.0 con le seguenti variazioni minori: Sezione Simboli usati sostituita dalla tabella Glossario dei simboli Aggiunta la casella per la firma della sezione Revisioni * Le barre delle modifiche indicano la posizione del testo aggiornato rispetto alla versione precedente del documento. Quando le presenti Istruzioni per l uso saranno sostituite da quelle aggiornate, apporre la propria firma e la data e conservare in base alle direttive locali o ai regolamenti del laboratorio. Firma Data Versione 1.0 Pubb. n. GEM1401_IT 7

8 Condizioni di fornitura: tutte le forniture sono soggette ai termini e alle condizioni di vendita della ditta Ortho-Clinical Diagnostics e dei suoi distributori. Copie di tali condizioni saranno disponibili su richiesta. Ortho-Clinical Diagnostics Johnson & Johnson Holmers Farm Way High Wycombe Buckinghamshire HP12 4DP United Kingdom VITROS è un marchio di Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Ortho-Clinical Diagnostics, Inc., Pubb. n. GEM1401_IT Versione 1.0