Ferr. ISTRUZIONI PER L USO VITROS Immunodiagnostic Products Confezione dei reagenti ferritina

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1 ISTRUZIONI PER L USO VITROS Immunodiagnostic Products Confezione dei reagenti ferritina Ferr Impiego Per la misura quantitativa in vitro della ferritina nel siero e plasma umani (eparina). La misurazione della ferritina permette la diagnosi delle malattie che colpiscono il metabolismo al livello del ferro come l emocromatosi (ferro in eccesso) o le anemie (carenza in ferro). Compendio e spiegazione del dosaggio La ferritina ha funzione di sito intracellulare per la conservazione del ferro. Nel siero si trovano concentrazioni clinicamente significative e il livello della ferritina nel siero è direttamente collegato alla riserva di ferro nel corpo 1. I livelli di ferritina nel siero vengono determinati per valutare le riserve di ferro in pazienti normali, pazienti con carenza o eccesso di ferro oppure per valutare le riposte alle terapie a base di ferro. L uso clinico della misurazione della ferritina è stato ampiamente riveduto 1-6. Principi della procedura Il dosaggio VITROS della ferritina è eseguito utilizzando la confezione di reagente ferritina e i calibratori per ferritina dei prodotti per immunodiagnostica VITROS, sul sistema VITROS per immunodiagnostica. Viene utilizzata una tecnica immunometrica a due fasi, che implica la reazione della ferritina presente nel campione con un anticorpo biotinilato (policlonale di pecora anti-ferritina) nella prima fase. Il complesso antigene-anticorpo è poi catturato dalla streptavidina che riveste il pozzetto e i materiali non legati vengono eliminati mediante lavaggio. La seconda fase implica la reazione del complesso antigene-anticorpo con un anticorpo coniugato marcato con perossidasi di rafano (monoclonale di topo anti-ferritina). I materiali non legati vengono nuovamente eliminati mediante lavaggio. Il coniugato con perossidasi da rafano legato viene misurato mediante reazione luminescente 7. Un reagente, contenente substrati luminogenici (derivato del luminolo e sale peracido) ed un agente di trasferimento di elettroni, viene aggiunto ai pozzetti. La perossidasi da rafano nel coniugato legato catalizza l ossidazione del derivato del luminolo, dando origine a produzione di luce. L agente di trasferimento di elettroni (acetanilide sostituita) provoca un aumento del livello di luce prodotta prolungandone l emissione. I segnali luminosi vengono letti dal Sistema VITROS. Il quantitativo di coniugato con perossidasi da rafano legato è direttamente proporzionale alla concentrazione di ferritina presente. Avvertenze e precauzioni Solo per uso diagnostico in vitro AVVERTENZA: Materiale potenzialmente infettivo I calibratori per ferritina VITROS contengono emoderivati provenienti da donatori umani i quali sono stati sottoposti a test individuali usando metodi approvati (immunodosaggio enzimatico) e risultati negativi per quanto concerne la presenza dell antigene di superficie dell epatite B, di anticorpi del virus dell immunodeficienza umana (HIV 1+ 2) e del virus dell epatite C (HCV). Trattare come prodotto potenzialmente infettivo. Si raccomanda di usare la dovuta cautela nel maneggiare i campioni di origine umana. Tutti i campioni sono da considerare come potenziale fonte di infezione. Nessun metodo sperimentale può garantire con assoluta certezza l assenza del virus dell epatite B, HCV, dell HIV 1+2 o di altri agenti infettivi. Campioni e componenti del dosaggio devono essere manipolati, conservati ed eliminati in forma solida o liquida in conformità alle procedure dettate dalle relative direttive e normative nazionali in materia di sicurezza biologica (per es. Direttiva M29 del NCCLS 8 ). AVVERTENZA: Contiene ProClin 300 Il reagenti contenente del ProClin 300. R43: Può provocare sensibilizzazione per contatto con la pelle. R52/53: Nocivo per gli organismi acquatici, può provocare a lungo termine effetti negativi per l ambiente acquatico. S24: Evitare il contatto con la pelle. S37: Usare guanti adatti. Versione 1.0 Pubb. n. GEM1340_IT 1

2 Ferr ISTRUZIONI PER L USO Materiali forniti Materiali forniti 1 confezione dei reagenti contenente: 100 pozzetti rivestiti (streptavidina, leganti 3 ng biotina/pozzetto). 19,4 ml reagente anticorpo biotinilato (biotinilato policlonale di pecora anti-ferritina, legante 130 ng ferritina/ml) in tampone con agente antimicrobico. 19,4 ml reagente coniugato (HRP-monoclonale di topo anti- ferritina a 0,1 µg/ml) in tampone con agente antimicrobico. NB: Contiene siero albumina bovina e gamma globulina bovina. Materiali richiesti, ma non forniti nel kit Sistema VITROS per immunodiagnostica, oltre ai seguenti prodotti immunodiagnostici VITROS: Calibratori per ferritina (comprese scheda di calibrazione lotti e scheda dei protocolli), reagente di segnale, reagente di lavaggio universale, diluente per campioni ad elevata concentrazione B, contenitore per la conservazione delle confezioni di reagenti (opzionale) con essiccante. Preparazione e conservazione dei reagenti Le Confezioni di Reagenti per Prodotti Immunodiagnostici VITROS contengono reagenti liquidi omogenei che non devono essere agitati né mescolati prima di essere caricati sul sistema. Come tutte le soluzioni per dosaggi immunologici a base di proteine, una manipolazione scorretta della confezione di reagente può provocare la formazione di schiuma sulla superficie del reagente stesso. La confezione dei reagenti viene fornita pronta per l uso. Conservare i reagenti in condizioni integre a 2-8 C. Non congelare. Una volta aperta, utilizzare la confezione dei reagenti entro 8 settimane dal primo caricamento sul sistema. Non usare oltre la data di scadenza. Conservare le confezioni di reagenti aperte direttamente sul sistema o a 2-8 C in apposito contenitore ermetico per la conservazione delle confezioni di reagenti sigillati con essiccante a secco. I calibratori per ferritina VITROS vengono forniti liofilizzati. Conservare i calibratori integri a 2-8 C. Non usare oltre la data di scadenza. Ricostituire con 1,0 ml di acqua distillata. Dopo la ricostituzione conservare per un massimo di 13 settimane a 2-8 C o di 13 settimane a -20 C (è ammesso un solo ciclo di congelamento-scongelamento). Preparazione del paziente Non è necessaria alcuna preparazione specifica del paziente. Raccolta, preparazione e conservazione dei campioni Si possono usare campioni di siero o plasma (eparina). Per la raccolta dei campioni ematici attenersi a procedure standard. I campioni di plasma (eparina), quando comparati con i corrispettivi campioni di siero, mostrano un bias negativo del 15%. I campioni di siero possono essere conservati fino ad un massimo di 5 giorni a 2-8 C o di 4 settimane a -20 C. Evitare congelamenti e scongelamenti ripetuti dei campioni di siero. I campioni di plasma (eparina) possono essere conservati fino a 5 giorni a 2-8 C. I campioni di plasma (eparina) non devono essere congelati. Si è riscontrato che alcuni dispositivi di prelievo del campione biologico hanno determinato alterazioni all integrità di determinati analiti provocando interferenze nella determinazione analitica 9. Considerata la varietà di dispositivi per la raccolta dei campioni disponibili in commercio, la Ortho-Clinical Diagnostics non è in grado di definire con assoluta certezza le prestazioni dei propri prodotti con tutti i diversi dispositivi. Si raccomanda pertanto che i singoli utilizzatori verifichino che il sistema di prelievo da loro adottato venga usato nel rispetto delle istruzioni della Casa produttrice e sia compatibile con il sistema VITROS. Note sul controllo di qualità e sulla procedura Maneggiare la confezione dei reagenti con cura evitando la formazione di condensa sulla scatola, evitando la formazione di schiuma nei reagenti ed infine cercando di non agitare la scatola stessa. Se le Confezioni di Reagenti VITROS vengono capovolte o agitate, piccole quantità di schiuma sottile possono risultare impossibili da rilevare dal Sistema VITROS. Le Confezioni di Reagenti contenenti una schiuma sottile che non viene rilevata possono mostrare un bias negativo. Se dovete utilizzare una confezione di reagente che è stata capovolta o agitata prima che abbia avuto la possibilità di depositarsi, dovrete verificarne le prestazioni eseguendo campioni in duplicato ai fini del controllo qualità dopo aver caricato la confezione sul sistema. La calibrazione è specifica per i singoli lotti; le confezioni di reagenti e i calibratori vengono associati in base al numero del lotto. Le confezioni di reagenti dello stesso lotto possono utilizzare la medesima calibrazione, che dev essere effettuata con calibratori aventi lo stesso numero di lotto. Mescolare perfettamente i campioni, i calibratori e i controlli per inversione e portarli a C prima dell uso. Manipolare i campioni, calibratori e controlli in contenitori chiusi al fine di evitare contaminazione ed evaporazione. Per evitare l evaporazione, limitare il numero di campioni, calibratori e controlli presenti sul sistema VITROS. Per maggiori informazioni vedere la Guida dell Operatore del Sistema VITROS. Riportandoli tempestivamente a 2-8 C dopo l uso, oppure caricarne soltanto un quantitativo sufficiente ad una singola determinazione. 2 Pubb. n. GEM1340_IT Versione 1.0

3 ISTRUZIONI PER L USO Procedura Ferr Verificare periodicamente il materiale a disposizione assicurando la corretta gestione dei reagenti e la disponibilità di lotti di reagenti di Segnale, Reagenti di Lavaggio Universale e Reagenti calibrati sufficienti a condurre le analisi programmate. Dovendo eseguire una serie di dosaggi su un singolo campione, è opportuno accertarsi che il volume di campione sia sufficiente ad effettuare i dosaggi richiesti. La buona prassi di laboratorio prevede l esecuzione di controlli ai fini della verifica delle prestazioni del dosaggio eseguito. I controlli per anemia VITROS contengono 3 idonei livelli di ferritina (basso, medio, alto). Si raccomanda di eseguire i controlli contestualmente all esecuzione di una calibrazione e, successivamente, almeno una volta ogni 24 ore e dopo l esecuzione delle procedure di controllo previste (Cfr. la Guida dell Operatore del Sistema VITROS). Se le procedure di controllo di qualità interne richiedono un uso più frequente dei controlli, è opportuno attenersi alle procedure previste. Per maggiori informazioni vedere la Guida dell Operatore del Sistema VITROS. Il nome predefinito del dosaggio che appare sul referto del paziente è Ferritin. L abbreviazione predefinita che appare sui menu di selezione dei dosaggi e sui referti di laboratorio è Ferr. Se necessario è possibile riconfigurare questi valori predefiniti dalla videata di configurazione degli analiti nelle Opzioni e Configurazioni. I campioni di siero con valori superiori all intervallo di calibrazione possono essere diluiti, prima del dossagio, fino a 1/10 con diluente per campioni ad elevata concentrazione B. Fare riferimento al foglietto illustrativo del diluente per campioni ad elevata concentrazione B. Procedura Il dosaggio per ferritina VITROS richiede 15 µl di campione, calibratore o controllo per una determinazione singola, indipendentemente dal volume minimo di riempimento del contenitore per campioni utilizzato. Il dosaggio per ferritina VITROS dev essere calibrato ogni volta si usi un nuovo lotto di reagenti e, successivamente, ad intervalli di 28 giorni. Il dosaggio per ferritina VITROS dev essere calibrato anche dopo l esecuzione di alcune procedure di controllo oppure se i risultati del controllo qualità differiscono molto dal range accettabile. Per informazioni più dettagliate sul funzionamento del sistema si veda la Guida dell Operatore del Sistema immunodiagnostico VITROS, capitoli 4-7. In breve: 1. Effettuare la scansione della scheda dei protocolli per caricare un nuovo protocollo di analisi sul sistema. A questo punto viene visualizzato il pulsante relativo alle diverse determinazioni sulla videata di programmazione dei campioni. Effettuare la scansione della scheda di calibrazione dei lotti per ogni nuovo lotto di reagenti per immettere i dati di scadenza e di calibrazione specifici per quel lotto. 2. Aprire la busta e prelevare la confezione dei reagenti. Caricare la confezione sull unità di autocaricamento o utilizzare il pulsante di scarico/carico nella videata di gestione dei reagenti (visualizzazione per reagente). NOTA: Non utilizzare prodotti danneggiati o non sigillati perfettamente. 3. Caricare i campioni nei settori portacampioni universali usando, se necessario, appositi adattatori (volendo, si possono identificare i campioni con codici a barre). Collocare un puntale monouso accanto ai singoli campioni e caricare i settori sul sistema. Definire i programmi dei campioni tramite la videata di programmazione dei campioni. Avviare la funzione di campionamento. Tutte le fasi di campionamento vengono effettuate automaticamente. 4. Processare i calibratori analogamente ai campioni. Trasferire un aliquota di ogni calibratore nel contenitore del campione (tenendo conto del volume di riempimento minimo del contenitore), che può essere identificato tramite codice a barre con l etichetta fornita. Non è necessario programmare la calibrazione se si usano etichette con codici a barre. Caricare i calibratori nell ordine voluto, la calibrazione parte automaticamente. Risultati Per costruire la curva di calibrazione principale codificata sulla scheda di calibrazione dei lotti si usa una funzione di aggiustamento di curva logistica a quattro parametri modificata. Il processo di calibrazione riposiziona la curva di calibrazione principale definendo una curva valida che viene memorizzata per il sistema. Per maggiori informazioni leggere le istruzioni per l uso dei calibratori. I risultati vengono calcolati automaticamente dal Sistema VITROS. Versione 1.0 Pubb. n. GEM1340_IT 3

4 Ferr ISTRUZIONI PER L USO Controllo di qualità Controllo di qualità I risultati di calibrazione vengono confrontati con un range di parametri di qualità che appaiono in dettaglio nella videata dei parametri di calibrazione alla quale si accede dalle Opzioni e Configurazioni (videata di revisione/calibrazioni utente). Se non vengono rispettati tutti i range dei parametri di qualità definiti, sul rapporto di calibrazione appare un codice d identificazione. Per le operazioni da eseguire successivamente ad una calibrazione non andata a buon fine si veda il capitolo 8 della Guida dell Operatore (Revisione dei risultati). I valori dei campioni dei pazienti che non rientrano nell intervallo di riferimento vengono identificati con un codice elevato HI. I valori dei controlli vengono identificati se 2 DS rispetto alla media della linea di base definita. Non esistono parametri individuali in grado di descrivere completamente la qualità dell aggiustamento della curva. Il rapporto di calibrazione dev essere utilizzato in abbinamento a valori di controllo ai fini della determinazione della validità della calibrazione. Se i risultati di controllo differiscono di molto dal range accettabile, indagarne la causa prima di decidere se annotare i risultati del paziente. Limiti della procedura I risultati ottenuti con questo o altri kit diagnostici devono essere utilizzati ed interpretati esclusivamente nel contesto del quadro clinico generale. Gli anticorpi eterofili nei campioni di siero possono provocare interferenze negli immunodosaggi 10. Questi anticorpi possono essere presenti nei campioni di sangue provenienti da individui a contatto con animali o che sono stati curati con prodotti derivati da siero animale. I risultati che sono contraddittori con le osservazioni cliniche indicano che sono necessari altri test. I campioni contenenti trioleina (33,9 mmol/l), emoglobina (5 g/l) o bilirubina (0,342 mmol/l) interferiscono con questo dosaggio rispettivamente in ragione di meno del 10%, 7% e 5%. Non usare campioni torbidi. I livelli di biotina nel siero restano elevati fino a 24 ore dopo somministrazione orale o endovenosa di biotina. I campioni contenenti 10 ng di biotina/ml interferiscono in ragione di meno del 2%. Valori attesi Ogni laboratorio dovrebbe confermare la validità degli intervalli di rifermento rispetto alla popolazione afferente. A titolo indicativo sono stati determinati intervalli di riferimento (2,5 e 97,5 percentile) usando campioni di siero. Per i maschi è stato determinato (utilizzando 310 sieri di uomini apparentemente sani) un intervallo di riferimento di 17,9-464 ng/ml, con una mediana di 96,2 ng/ml. Per le femmine di età inferiore a 50 anni è stato determinato (utilizzando 152 sieri di donne apparentemente sane) un intervallo di riferimento di 6, ng/ml, con una mediana di 29,7. Per le femmine di età superiore a 50 anni è stato determinato (utilizzando 98 sieri di donne apparentemente sane) un intervallo di 11,1-264 ng/ml, con una mediana di 48,7 ng/ml. Da 46 soggetti con deficienza di ferro è stato determinato un intervallo di riferimento di 2,83-30,7 ng/ml. Da 43 soggetti con sovraccarico di ferro è stato determinato un intervallo di ng/ml. Prestazioni metodologiche Calibrazione e modalità per ricostruirla L intervallo di calibrazione del dosaggio ferritina VITROS è di ng ferritina/ml (ricavabile da calibratori di riferimento interni che sono stati avvalorati per essere messi in correlazione con un altro dosaggio disponibile in commercio). La concentrazione di ferritina è misurata in ng/ml. Accuratezza Si è ottenuta una correlazione tra il dosaggio ferritina VITROS e un dosaggio del commercio (X) misurando un pannello di 130 campioni di pazienti appartenenti a diverse categorie cliniche. I campioni utilizzati coprivano un intervallo di ng/ml con il dosaggio ferritina VITROS e ng/ml con il dosaggio in commercio: Dosaggio ferritina VITROS = 0,974 x X +10,7 (ng/ml), con coefficiente di correlazione di 0, Pubb. n. GEM1340_IT Versione 1.0

5 ISTRUZIONI PER L USO Bibliografia Ferr Precisione La precisione è stata valutata secondo il protocollo EP5-T2 11 del National Committee for Clinical Laboratory Standards. Due replicati di ciascuno dei 3 sieri di controllo liofilizzati sono stati dosati in 2 differenti occasioni ogni giorno per 20 giorni. L esperimento è stato eseguito due volte usando 2 lotti di reagenti differenti su 2 Sistemi differenti. I dati presentati sono rappresentativi delle prestazioni del prodotto. Tabella 1: Precisione Concentrazione Giornaliera Intracalibrazione Intralaboratorio tipica ng/ml DS* CV(%)* DS* CV(%)* DS* CV(%)* 10,8 0,172 1,6 0,480 4,5 0,487 4, ,92 1,8 8,08 5,0 10,0 6, ,51 2,0 24,5 5,2 41,1 8,3 * Quadratica media Giornaliera: Precisione fra un duplicato e l altro, con media ottenuta su tutti i replicati. Intracalibrazione: Precisione totale, con componenti ponderati di variazione intra-dosaggio, inter-dosaggio e da un giorno all altro. Intralaboratorio: Misura dell effetto della ricalibrazione sulla precisione totale, calcolata nell ambito di un singolo lotto di reagenti, utilizzando dati di 4 calibrazioni. Sensibilità La sensibilità analitica viene definita come la concentrazione di 2 deviazioni standard rispetto alla media di un campione che non contiene analiti, dove vengono determinati 20 replicati. Tipicamente, la sensibilità del dosaggio ferritina VITROS è di meno del 1 ng/ml. Bibliografia 1. Alfrey CP. Clin Lab Sci 9: (1978). 2. Valberg LS. Can Med Assoc J 122: (1980). 3. Worwood M. Clin Lab Sci 10: (1979). 4. Cook JD. Semin Hematol 19: 6-18 (1982). 5. Kirking MH. Clin Pharm 10: (1991). 6. Worwood M. Blood Rev 4: (1990). 7. Summers M et al. Luminogenic Reagent Using 3-Chloro 4-HydroxyAcetanilide to Enhance Peroxidase/Luminol Chemiluminescence. Clin Chem 41. S73 (1995). 8. NCCLS. Protection of laboratory Workers from Instrument biohazards and Infectious Diseases Transmitted by Blood, Body Fluids and tissue; Approved guideline. NCCLS Document M29-A (ISBN ). NCCLS, Wayne, PA 19087; Calam RR. Specimen Processing Separator Gels: An Update. J Clin Immunoassay 11: (1988). 10. Levinson SS. The Nature of Heterophilic Antibodies and Their Role in Immunoassay Interference. J Clin Immunoassay 15: (1992) 11. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Order Code EP5-T2. (1992). Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices - Second Edition Versione 1.0 Pubb. n. GEM1340_IT 5

6 Ferr ISTRUZIONI PER L USO Glossario dei simboli Glossario dei simboli 6 Pubb. n. GEM1340_IT Versione 1.0

7 ISTRUZIONI PER L USO Revisioni Ferr Revisioni Data revisione Versione Modifiche tecniche apportate* Nuovo formato, tecnicamente equivalente a PIGEM1340/101.0 con le seguenti variazioni minori: Sezione Simboli usati sostituita dalla tabella Glossario dei simboli Aggiunta la casella per la firma della sezione Revisioni * Le barre delle modifiche indicano la posizione del testo aggiornato rispetto alla versione precedente del documento. Quando le presenti Istruzioni per l uso saranno sostituite da quelle aggiornate, apporre la propria firma e la data e conservare in base alle direttive locali o ai regolamenti del laboratorio. Firma Data Versione 1.0 Pubb. n. GEM1340_IT 7

8 Ferr ISTRUZIONI PER L USO Condizioni di fornitura: tutte le forniture sono soggette ai termini e alle condizioni di vendita della ditta Ortho-Clinical Diagnostics e dei suoi distributori. Copie di tali condizioni saranno disponibili su richiesta. Ortho-Clinical Diagnostics Johnson & Johnson Holmers Farm Way High Wycombe Buckinghamshire HP12 4DP United Kingdom VITROS è un marchio di Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Ortho-Clinical Diagnostics, Inc., Pubb. n. GEM1340_IT Versione 1.0