Bioinformatica (modulo bioinf. dei genomi moderni )

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1 Bioinformatica (modulo bioinf. dei genomi moderni ) Dr. Marco Fondi Lezione # 5 Corso di Laurea in Scienze Biologiche, AA giovedì 3 novembre

2 Sequenziamento ed analisi di genomi: la genomica Identificazione di SNPs giovedì 3 novembre

3 La genomica è una branca della biologia molecolare che si occupa dello studio del genoma degli organismi viventi. In particolare si occupa della struttura, contenuto, funzione ed evoluzione del genoma. È una scienza che si basa sulla bioinformatica per l'elaborazione e la visualizzazione dell'enorme quantità di dati che produce. venerdì 17 dicembre 2010

4 giovedì 3 novembre

5 giovedì 3 novembre

6 giovedì 3 novembre 2011

7 giovedì 3 novembre

8 Next Generation Sequencing 454, Roche ABI's SOLiD Method. Solexa, Illumina PACIFIC BIOSCIENCES Desktop Ion torrent 454 GS junior Illumina miseq giovedì 3 novembre 2011

9 giovedì 3 novembre 2011

10 giovedì 3 novembre strategy

11 454 strategy 454 Platform Strategy Sample preparation : overview Genomic DNA Fragmentation Adaptor ligation Single Strand Library (sstdna) Emulsion PCR (clonal amplification) Beads Recovery and Count PicoTiterPlate (PTP) Bead Deposition Pyrosequencing giovedì 3 novembre 2011

12 giovedì 3 novembre strategy

13 454 strategy PicoTiterPlate (PTP) Loading And Sequencing Run. CCD camera : pyrosequencing spot light detection giovedì 3 novembre 2011

14 giovedì 3 novembre strategy

15 giovedì 3 novembre strategy

16 giovedì 3 novembre strategy

17 giovedì 3 novembre strategy

18 giovedì 3 novembre strategy

19 giovedì 3 novembre strategy

20 sequenced DNA fragment 454 reads sequenced DNA fragment Illumina reads giovedì 3 novembre 2011

21 Genomica: le 4 A Genomica: le 4 fasi 1. Assemblaggio 2. Assegnazione 3. Annotazione 4. Analisi (genomica comparativa) venerdì 17 dicembre 2010

22 Genomica: le 4 A Genomica: le 4 fasi 1. Assemblaggio 2. Assegnazione 3. Annotazione 4. Analisi (genomica comparativa) venerdì 17 dicembre 2010

23 genoma 454, Roche ABI's SOLiD Method. Solexa, Illumina venerdì 17 dicembre 2010

24 genoma 454, Roche ABI's SOLiD Method. Solexa, Illumina venerdì 17 dicembre 2010

25 genoma 454, Roche ABI's SOLiD Method. Solexa, Illumina campione venerdì 17 dicembre 2010

26 genoma 454, Roche ABI's SOLiD Method. Solexa, Illumina campione venerdì 17 dicembre 2010

27 454, Roche ABI's SOLiD Method. Solexa, Illumina sequenza genoma venerdì 17 dicembre 2010

28 454, Roche ABI's SOLiD Method. Solexa, Illumina sequenza genoma venerdì 17 dicembre 2010

29 454, Roche ABI's SOLiD Method. Solexa, Illumina reads sequenza genoma venerdì 17 dicembre 2010

30 genome venerdì 17 dicembre 2010

31 genome reads venerdì 17 dicembre 2010

32 genome reads reads assembly contigs A B C venerdì 17 dicembre 2010

33 contigs A B C GAP GAP venerdì 17 dicembre 2010

34 contigs A B C oppure GAP GAP contigs B A C GAP GAP venerdì 17 dicembre 2010

35 contigs A B C oppure GAP GAP contigs B A C GAP GAP oppure... venerdì 17 dicembre 2010

36 GAP closure 1 A B reads venerdì 17 dicembre 2010

37 GAP closure 1 A B reads no overlap? sì A B contig esteso venerdì 17 dicembre 2010

38 GAP closure 2 1. reference genome A B venerdì 17 dicembre 2010

39 GAP closure 2 1. reference genome A B 2. reference genome reads venerdì 17 dicembre 2010

40 GAP closure 2 1. reference genome A B 2. reference genome reads 3. reference genome A contig esteso B venerdì 17 dicembre 2010

41 giovedì 3 novembre 2011

42 draft genome giovedì 3 novembre 2011

43 complete genome draft genome giovedì 3 novembre 2011

44 giovedì 3 novembre 2011

45 giovedì 3 novembre 2011

46 giovedì 3 novembre 2011 Genoma completamente sequenziato

47 E ora?? giovedì 3 novembre 2011

48 Genomica: le 4 A Genomica: le 4 fasi 1. Assemblaggio 2. Assegnazione 3. Annotazione 4. Analisi (genomica comparativa) venerdì 17 dicembre 2010

49 annotation quanti e quali geni sono presenti nel genoma sequenziato? giovedì 3 novembre 2011

50 from prediction to FASTA!"#$"%&'()*+%,-./-01-%23-4% "$A"$B"BA$A"$B"BB"$BA"$A$BA"$BA"$B$"AB$"BA"$B A"$BA"$BA$"BA$"AB$"AB$"AB$"AB$"A$"AB$"BA"$"$ $"$"$"$"BA$BAB$"A"$AB"$"$AB"A$"$"B$"AB$""BAAA A"B$A"$A"$""$$"$"$"$"BABABAB$"AB$"AB$"BA$"B$" $"$B"AB$"A$BA"$BA"$AB$"AB$"AB$"AB$"AB$"AB$"A B$AB$"AB$"AB$"AB$"$AB$"""$"$"$"$"BABA"$B"$A"B $ABA"A$B"AB$"B$A"$B"A$BA"$BA"$BA"$BA% giovedì 3 novembre 2011

51 2. Assegnazione 3. Annotazione venerdì 17 dicembre 2010

52 Genomica: le 4 A Genomica: le 4 fasi 1. Assemblaggio 2. Assegnazione 3. Annotazione 4. Analisi (genomica comparativa) venerdì 17 dicembre 2010

53 Genomica comparativa genoma 1 genoma 2 genoma 3 venerdì 17 dicembre 2010

54 core genome genoma 1 genoma 2 genoma 3 venerdì 17 dicembre 2010

55 accessory genome genoma 1 genoma 2 genoma 3 venerdì 17 dicembre 2010

56 1. GC% Misurare la composizione GC% = ng + nc N?!"#$"%&'()*+%,-./-01-%23-4% 56+'3'7,-./-08*%9-,:%;<#7=(/>>'???@% "$A"$B"BA$A"$B"BB"$BA"$A$BA"$BA"$B$"AB$"BA"$B A"$BA"$BA$"BA$"AB$"AB$"AB$"AB$"A$"AB$"BA"$"$ $"$"$"$"BA$BAB$"A"$AB"$"$AB"A$"$"B$"AB$""BAAA A"B$A"$A"$""$$"$"$"$"BABABAB$"AB$"AB$"BA$"B$" $"$B"AB$"A$BA"$BA"$AB$"AB$"AB$"AB$"AB$"AB$"A B$AB$"AB$"AB$"AB$"$AB$"""$"$"$"$"BABA"$B"$A"B $ABA"A$B"AB$"B$A"$B"A$BA"$BA"$BA"$BA%? giovedì 3 novembre 2011

57 giovedì 3 novembre GC%

58 assegnazione funzionale giovedì 3 novembre 2011

59 identificazione di SNPs e metagenomica giovedì 3 novembre 2011

60 identificazione di SNPs 1. batteri resistenti ad un antibiotico X 1. batteri sensibili ad un antibiotico X 2. Cellule tumorali 2. Linea cellulare sana 3. ceppi produttori di una certa sostanza 3. ceppi iper- o ipoproduttori di una certa sostanza giovedì 3 novembre 2011

61 identificazione di SNPs 1. batteri resistenti ad un antibiotico X 1. batteri sensibili ad un antibiotico X 2. Cellule tumorali 2. Linea cellulare sana 3. ceppi produttori di una certa sostanza 3. ceppi iper- o ipoproduttori di una certa sostanza ri-sequenziamento del genoma genoma completo giovedì 3 novembre 2011

62 identificazione di SNPs 1. batteri resistenti ad un antibiotico X 1. batteri sensibili ad un antibiotico X 2. Cellule tumorali 2. Linea cellulare sana 3. ceppi produttori di una certa sostanza 3. ceppi iper- o ipoproduttori di una certa sostanza genoma completo milioni di reads giovedì 3 novembre 2011

63 identificazione dei mutanti ri-sequenziamento reads mapping identificazione SNPs giovedì 3 novembre 2011

64 identificazione dei mutanti ri-sequenziamento bioinformatica reads mapping identificazione SNPs giovedì 3 novembre 2011

65 giovedì 3 novembre 2011

66 giovedì 3 novembre 2011

67 giovedì 3 novembre 2011

68 giovedì 3 novembre 2011

69 giovedì 3 novembre 2011

70 identificazione dei mutanti lista di geni con mutazioni ri-sequenziamento sinonime vs. reads mapping non sinonime identificazione SNPs PCR di conferma giovedì 3 novembre 2011 gene(i) responsabili del fenotipo osservato

71 PARTE 1 Assegnazione Funzionale (KEGG) GI sequenza fasta Ricerca Sequenze Simili (BLAST) BLAST Multiallineamento (ClustalW) clustalw (bioedit) Conservazione allineamento (Entropia) giovedì 3 novembre 2011

72 PARTE 2 file di sequenze Fiologenesi, albero filogenetico clustalw (bioedit) Multiallineamento Conservazione allineamento (Entropia) Editing allineamento WEBLOGO giovedì 3 novembre 2011

73 giovedì 3 novembre 2011

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