La diagnosi richiede la combinazione di almeno un criterio clinico e un criterio di laboratorio.
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- Vanessa Innocenti
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2 Gli anticorpi antifosfolipidi (apl) Gruppo eterogeneo di autoanticorpi specifici per: complessi fosfolipide-proteina cofattori fosfolipidi anionici Sono associati alla sindrome da anticorpi apl (APS): trombosi arteriose/venose/microcircolo aborti spontanei ricorrenti, perdite fetali presenza di anticorpi apl sierici La diagnosi richiede la combinazione di almeno un criterio clinico e un criterio di laboratorio. Pending issues: APS sieronegativa? Nuove specificità e meccanismi Solo meccanismi trombotici e/o ischemici non riescono a spiegare tutte le manifestazioni (es: neurologiche, complicanze gravidanza.)
3 Meccanismo patogenetico I John G. Hanly CMAJ June 24; 168(13):
4 Meccanismo patogenetico II a-β2gpi abs β2gpi dimers Endotelial cells Alard JE et al. J Immunol may 2010
5 Anticorpi apl: classificazione Lupus anticoagulans (LAC) Specificità: β2gpi, protrombina, PL neg,..?? La loro positività è più specifica per la sindrome APS agli ACAR. Anticardiolipina (ACAR) Distinti in: β2gpi-dip legano complessi PL-β2GPI, sono associati alla sindrome APS e a neurolupus. β2gpi-indip legano solo PL, privi di significato clinico
6 Anticorpi apl: classificazione Anticorpi anticofattore: Predominant target: β2gpi β2gpi in vitro inibisce l attivazione della protrombina da parte dei fattori Xa e Va su una superficie PL e funge da antiaggregante piastrinico. Altri target emergenti: protrombina, complessi PT/PS annessina V proteina C, proteina S complessi cardiolipina/vimentina
7 Background Ortona et al. (Blood, oct 2010) hanno analizzato sieri di pazienti con APS sieronegativa alla ricerca di nuovi autoantigeni (approccio proteomico utilizzando estratto da membrana citoplasmatica di ECs) identificando la vimentina (proteina di 57 kda ubiquitaria presente nei filamenti intermedi del citoscheletro) come nuovo target di autoanticorpale nell APS. La vimentina interagisce fortemente con i PL sulla membrana delle ECs, soprattutto con la CARD. L antigene autoanticorpale specifico di APS è il complesso VIM/CARD. Gli anti-vim/card legando il complesso sulla superficie delle ECs attivano il pathway IRAK1/NF-kB innescando una reazione simile agli anticorpi antib2gpi (via TLR2/TLR4) con probabile up-regolazione della trascrizione di citochine proinfiammatorie.
8 Prevalence of antibodies to vimentin/cardiolipin complex anti-card/vim IgG n (%) IgM n (%) SeroNeg-APS 16/29 (55.2) 11/29 (37.9) APS 37/40 (92.4) 32/40 (80.0) SLE 13/30 (43.3) 13/30 (43.3) RA 5/30 (16.6) 5/30 (16.6) Thrombosis 2/30 (6.6) 0/30 (0) HBDs 0/32 (0) 0/32 (0) Ortona et al. Blood 2010
9 Scopo del lavoro Kit ELISA anti-card/vim IgG/IgM (DiaMetra) Analizzare la prevalenza di anti-vim/card nei pazienti afferenti al nostro laboratorio Paz LAC pos con ACAR/aβ2GPI neg con e senza sindrome APS
10 Pazienti 175 pazienti 153F/22M, età 53±15 anni (range 18-88) I. 89 paz LAC pos/bordeline di cui: - 19 ACAR/aβ2GPI pos - 70 ACAR/aβ2GPI neg II. 68 paz LAC neg e ACAR/aβ2GPI neg III. 18 paz LAC non valutabile ACAR/aβ2GPI pos/neg
11 Pazienti Clinicamente: n. 90 LES / UCTD / snd APS (n. 14) n. 75 altre connettiviti e vasculiti (AR, SpA, SjS, SSc, MCsn, PMR, etc) n. 8 eventi trombotici aterovenosi dndd n. 2 riscontro casuale LAC pos Follow-up 8 pazienti con connettiviti (7 LES, 1 Sjögren s syndrome): dosaggi ripetuti nel follow-up 73 controlli (donatori) 23F/46M, età 37±13 anni (range 18-65)
12 Materiale e Metodi Test ELISA per anti-card/vim IgG (su 175 paz) e IgM (su 129 paz) preliminari sviluppati da DiaMetra Substrato: complesso card/vim Non avendo una curva di riferimento definitiva abbiamo considerato i valori di OD Specificità e Sensibilità da determinare Precisione: Inter assay variability 9.6±6.0% Statistics Mann-Whitney Unpaired U-test
13 Cut-off sulla popolazione di IgG a-card/vim controllo ABS media 0.152± perc Pos (abs>0.280) 4/73, 5.5%: specificità 94.5% IgM a-card/vim ABS media 0.200± perc Pos (abs>0.511) 3/73, 4.1%: specificità: 95.9%
14 I. LAC pos/borderline: Paz vs HBDs Anti-CARD/VIM IgG Pos TOT 6/89, 6.7% di cui: 5/70, 7.1% tra i paz ACAR/B2GPI neg 1/19, 5.3% tra i paz ACAR/B2GPI pos Anti-CARD/VIM IgM Pos TOT 14/82, 17.1% di cui: 11/64, 17.2% tra i paz ACAR/B2GPI neg 3/18, 16.7% tra i paz ACAR/B2GPI pos p= ns **p=
15 I. LAC pos/borderline: LES/UCTD vs altre patologie Anti-CARD/VIM IgG LES/UCTD/APS 3/54, 5.6% vs Altre patologie 3/35, 8.6% Anti-CARD/VIM IgM LES/UCTD/APS 12/53, 22.6% Altre patologie 2/29, 6.9% p=ns *p=0.028
16 Aspecificità anti-card/vim IgG? 3 PAZIENTI LAC pos Casi anti-card/vim pos con altre patologie IgG acard/vim IgM acard/vim 1 aptt allungato con ACAR/B2GPI elevati, risc. casuale POS POS 2 Tumore polmone e TVP, ACAR/B2GPI neg POS NEG 3 Epatocarcinoma, ACAR/B2GPI neg POS NEG Anti-CARD/VIM IgG legati a eventi tromboembolici in corso di tumore?
17 II. LAC neg / ACAR/β2GPI neg: paz vs HBDs Anti-CARD/VIM IgG Pos TOT 2/68, 2.9% di cui: 1 paz Sjogren con cryo ACAR/β2GPI neg 1 paz con AR e snd mielodisplastica politrasfusa 30 LES/UCTD/APS nessun pos Anti-CARD/VIM IgM Pos TOT 5/29, 17.2% di cui: 5/25, 20.% tra i paz con LES/UCTD Paz con APS sieronegativa??? p=ns
18 III. LAC non valutabile: paz vs HBDs LAC non valutabile per TAO o non eseguito per fase acuta 12 paz con connettiviti e vasculiti (AR, Sjögren s snd, Bechêt, sindrome crioglobulinemica, SpA, PMR, SSc) 6 paz con LES Anti-CARD/VIM IgG Pos TOT 0/18, 0% Anti-CARD/VIM IgM Pos TOT 1/18, 5.6% 1 paz con scleroles ACAR IgM debolmente pos (16 UI/ml)
19 Follow-up 8 paz (7 LES, 1 SjS) Valutazione 6.9±1.5 mesi dopo PAZ delta time ACAR IgG ACAR IgM B2GPI IgG B2GPI IgM LAC note anti-vim/card IgG anti-card-vim IgM mesi abs pos (>0.280) abs (pos>0.511) BL NEG Sjs con MCsnd 0,564 0, NEG 0,507 0,199 CS borderline LES atrocutaneo 0,133 1, POS 0,124 1,55 CS > POS LES ematologico con snd apl 0,166 0, POS 0,27 0,476 FS POS LES severo ematologico in RTX 0,324 0, POS 0,286 0,149 FA POS UCTD in gravidanza, Cooms diretto pos 0,056 0, POS 0,135 0,182 SF POS LES ematologico, snd apl con ischemie cerebrali 0,032 0, ND (TAO) 0,037 nd SA POS LES artrocutaneo con snd apl 0,11 0, POS 0,071 0,162 VS borderline/neg LES severo in RTX 0,183 0, POS 0,268 0,716
20 Summary and conclusion Dati preliminari Confronto con Ortona et al. Blood 2010 Test IgG anti-card/vim non significativo, aspecifico da ottimizzare o IgG non specifiche? Sindrome paraneoplastica? Test IgM anti-card/vim specifico La % di positività è significativa solo in LES/UCTD/APS (21% vs 4.4%) ma poco sensibile (solo 17.1% di pos nei LAC pos) identifica 22% circa di casi LAC pos/borberline con ACAR/B2GPI neg in paz LES/UCTD/APS sensibile alla iniziale positivizzazione LAC identifica 20% di LES/UCTD con presunta APS sieronegativa
21 Ringraziamenti Laboratorio di Immunopatologia e Allergologia Tonutti Elio Visentini Daniela Molinaro Patrizia Blasone Nadia Peresan Jessica Laboratorio Emostasi Giacomello Roberta D Aurizio Federica DiaMetra Giuliani Ferdinando Tarpanelli Tiziano
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