SPECIALfinder. Ricerca di allergeni alimentari con metodi molecolari

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Salvatore Leone
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1 SPECIALfinder Ricerca di allergeni alimentari con metodi molecolari

2 Il fenomeno degli allergeni occulti è legato alla presenza in modo non esplicito di un allergene in un alimento. Il confezionamento industriale dei cibi ha enormemente amplificato la possibilità di ingerire, in modo del tutto inaspettato, allergeni occulti (es: latte o soia nei salumi) con lo scatenamento di reazioni verso cibi totalmente estranei ed apparentemente innocui rispetto alle sensibilizzazioni note. La presenza di un allergene nascosto in un cibo confezionato determina, quando rilevata, il ritiro dal mercato del lotto del prodotto interessato. In Europa, la normativa riguardante gli allergeni alimentari è stata pubblicata nel 2003 (Direttiva 2003/89/ CE) e successivamente integrata con la Dir. 2006/142/CE. In particolare tale Direttiva riporta nell Annex IIIa una lista di ingredienti da indicare obbligatoriamente in etichetta. 2

I livelli soglia ai quali si scatena la reazione allergica non sono stati ancora determinati per la maggior parte degli allergeni alimentari, e quelli conosciuti, uovo, arachide e latte, possono

3 I livelli soglia ai quali si scatena la reazione allergica non sono stati ancora determinati per la maggior parte degli allergeni alimentari, e quelli conosciuti, uovo, arachide e latte, possono variare, da individuo ad individuo, da pochi milligrammi a qualche grammo. Proprio per questa variabilità, al momento non è possibile basare su questo parametro le regole di etichettatura; ciononostante l accuratezza di quanto dichiarato in etichetta è essenziale per il successo delle diete di eliminazione. Allerte RASFF per allergeni occulti allerte allerte Allerte USDA per allergeni occulti allerte 3000 tonnellate di recall allerte 5000 tonnellate di recall 3

4 Azzerare il rischio della presenza non intenzionale di allergeni alimentari, in numerose aziende è spesso impossibile. Per questa ragione, i produttori ricorrono talvolta a formule cautelative come «potrebbe contenere» oppure «preparato in uno stabilimento che utilizza». È però importante notare che l etichettatura cautelativa non può sostituire il sistema di gestione degli allergeni che ogni impresa alimentare ha l obbligo di attuare nell ambito del proprio sistema di gestione della sicurezza alimentare. Inoltre l uso ingiustificato di etichette cautelative può avere i seguenti effetti: i) eliminazione non necessaria di scelte sane dalla dieta di consumatori allergici o ii) riduzione della credibilità delle etichette e conseguente assunzione di rischi nei confronti di tali alimenti da parte di consumatori vulnerabili. Generon offre ai clienti il portafoglio analitico più ampio sul mercato, grazie alla propria attività di R&S ed alla collaborazione con aziende multinazionali di provata competenza ed affidabilità. 4

Il comparto alimentare necessita di metodi affidabili per individuare e quantificare gli allergeni, al fine di potenziare la tutela dei consumatori.

5 Il comparto alimentare necessita di metodi affidabili per individuare e quantificare gli allergeni, al fine di potenziare la tutela dei consumatori. Metodi affidabili sono importanti anche per permettere alle autorità per valutare la conformità dei prodotti alla legislazione. ELISA e PCR sono i principali metodi utilizzati per individuare e quantificare gli allergeni alimentari. L approccio più significativo scientificamente, considerando i limiti analitici delle due tecniche, dovrebbe essere il loro uso combinato. Auditing Fornitori Controllo Materie Prime in Ingresso Controllo Ingredienti Controllo Prodotto Finito Controllo degli impianti di lavorazione e confezionamento La PCR è utile per rilevare/quantificare gli allergeni soprattutto in alimenti trasformati, dato che il DNA è solitamente più resistente delle proteine e pertanto è meno probabile che venga completamente distrutto durante il processo di trasformazione. La Real-Time PCR è il metodo d elezione per effettuare la ricerca del DNA di allergeni, offrendo svariati vantaggi analitici fra i quali, la possibilità di introdurre un controllo di processo e/o di amplificazione e la possibilità di ricercare più parametri nello stesso estratto di DNA. 5

SPECIALfinder È la linea di saggi Real-Time PCR compatibili con la maggior parte degli strumenti Real-Time PCR sviluppata Campionamento da Generon per fornire ai propri clienti una soluzione

6 SPECIALfinder È la linea di saggi Real-Time PCR compatibili con la maggior parte degli strumenti Real-Time PCR sviluppata Campionamento da Generon per fornire ai propri clienti una soluzione chiavi-in-mano per la ricerca di allergeni alimentari. Tutti i test sono stati sviluppati e validati seguendo le linee guida della norma UNI-EN :2009. Generon fornisce tutta l assistenza necessaria all implementazione del Estrazione del DNA metodo ed alla sua validazione su matrici specifiche. ION-FORCE FAST DNA Extractor È il sistema estrattivo, abbinabile all utilizzo degli SPECIALfinder, che consente l estrazione degli acidi Quantificazione del DNA nucleici anche da cospicue unità campionarie garantendo un DNA privo di inibitori della reazione di PCR. In questo modo è possibile effettuare la ricerca di allergeni in svariate tipologie di matrice: materie prime, semilavorati, prodotti finiti, tamponi ambientali. La linea include anche: Amplificazione del DNA SPECIALfinder DigiCount Standard in numero di copie quantificate con tecnologia Droplet-Digital-PCR SPECIALfinder SpyX Analisi dei dati qpcr Dispersioni dell allergene in matrice mais contaminate a 1000 ppm 6

7 Informazioni utili all ordine Estrazione del DNA Quantificazione del DNA estratto EXD001 ION Force DNA extractor (100 estrazioni) ACC2037 Promega QUANTUS DNA Quantification System SPECIALfinder Assays (100 Tests) SPECIALfinder DigiCount (120 µl di DNA >1000 copie/µl) PAV01A SPECIALfinder Soia PAV01R SPECIALfinder DigiCount Soy (soia) PAV02A SPECIALfinder Arachide PAV02R SPECIALfinder DigiCount Peanut (arachide) PAV03A SPECIALfinder Nocciola PAV03R SPECIALfinder DigiCount Hazelnut (nocciola) PAV05A SPECIALfinder Noce Pecan PAV05R SPECIALfinder DigiCount Pecan Nut (noce Pecan)* PAV06A SPECIALfinder Noce PAV06R SPECIALfinder DigiCount Walnut (noce)* PAV07A SPECIALfinder Pistacchio PAV07R SPECIALfinder DigiCount Pistachio Nut (pistacchio) PAV08A SPECIALfinder Anacardo PAV08R SPECIALfinder DigiCount Cashew (anacardo) PAV09A SPECIALfinder Mandorla PAV09R SPECIALfinder DigiCount Almond (mandorla)* PAV10A SPECIALfinder Segale PAV10R SPECIALfinder DigiCount Rye (segale) PAV11A SPECIALfinder Avena PAV11R SPECIALfinder DigiCount Oats (avena)* PAV13A SPECIALfinder Sesamo PAV13R SPECIALfinder DigiCount Sesame (sesamo) PAV14A SPECIALfinder Senape PAV15R SPECIALfinder DigiCount Celery (sedano) PAV15A SPECIALfinder Sedano PAV16R SPECIALfinder DigiCount Brazil nut (noce brasiliana) PAV16A SPECIALfinder Noce Brasiliana PAV18R SPECIALfinder DigiCount Lupin (lupino)* PAV17A SPECIALfinder Glutine PAV20R SPECIALfinder DigiCount Fish (pesce)* PAV18A SPECIALfinder Lupino PAV21R SPECIALfinder DigiCount Macadamia* PAV19A SPECIALfinder Crostacei* SPECIALfinder spyx ppm in 5 g di farina di mais) PAV20A SPECIALfinder Pesce PAV01X SPECIALfinder spyx Soy (soia) PAV21A SPECIALfinder Macadamia PAV02X SPECIALfinder spyx Peanut (arachide) PAV22A SPECIALfinder Molluschi* PAV03X SPECIALfinder spyx Hazelnut (nocciola) Strumentazione Real-Time PCR PAV04X SPECIALfinder spyx Wheat (frumento) BR Bio-Rad CFX96 DeepWell PAV06X SPECIALfinder spyx Nut (noce) ACC2000 Notebook PC PAV08X SPECIALfinder spyx Cashew (anacardo) Accessori Utili PAV07X SPECIALfinder spyx Pistachio (pistacchio) ACC2082 Cutter INOX Variable Speed PAV09X SPECIALfinder spyx Almond (mandorla) ACC2029 Bagno termostatico ad acqua PAV10X SPECIALfinder spyx Rye (segale) ACC2063 Microcentrifuga per tubi 0,5-2 rpm PAV11X SPECIALfinder spyx Oats (avena) ACC2064 Microcentrifuga per tubi e strip rpm PAV13X SPECIALfinder spyx Sesame (sesamo) ACC2013 Micropipetta a volume variabile ul PAV15X SPECIALfinder spyx Celery (sedano) ACC2014 Micropipetta a volume variabile ul PAV16X SPECIALfinder spyx Brazil nut (noce brasiliana) ACC2016 Micropipetta a volume variabile 2-20 ul PAV18X SPECIALfinder spyx Lupin (lupino) ACC2095 Cappa per PCR PAV19X SPECIALfinder spyx Crustaceans (crostacei) ACC2003 Vortex a velocità variabile PAV20X SPECIALfinder spyx Fish (pesce) PAV21X SPECIALfinder spyx Macadamia PAV22X SPECIALfinder spyx Shellfish (molluschi) * in sviluppo PAV23X SPECIALfinder spyx Pinenut (pinoli) Sappiamo quanto la matrice testata possa influire sui risultati e vi mettiamo a disposizione tutta la nostra esperienza e i nostri laboratori nel caso sia necessario validare le performance del kit su un vostro specifico prodotto. Generon vi può inoltre fornire campioni contaminati artificialmente da utilizzare successivamente come controlli di processo. Sappiamo quanto sia importante la tempestività nella fornitura dei prodotti. Generon garantisce normalmente la consegna dei kit in 24 ore grazie al costante refill del magazzino.

8 Rev.2_ Generon S.p.A. Stradello Aggazzotti,104 Modena marketing@generon.it

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