DNA fetale nel sangue materno. Applicazioni e Prospettive

Dimensione: px

Iniziare la visualizzazioe della pagina:

Download "DNA fetale nel sangue materno. Applicazioni e Prospettive"

Cosimo Cicci
8 anni fa
Visualizzazioni

1 DNA fetale nel sangue materno. Applicazioni e Prospettive Sandro Gabrielli Clinica Ostetrica e Medicina Prenatale Policlinico S.Orsola-Malpighi, Bologna sandro.gabrielli@aosp.bo.it

3 PATOLOGIA Natera Verinata Sequenom Harmony BGI Lifecodexx Down syndrome (T21) >99% 99.9% 99.1% >99% 99.9% 97.6% Edwards syndrome (T18) >99% 97.4% >99% 98% 99.9% 100% Patau syndrome (T13) >99% 87.5% 91.7% 80% 99.9% 100% Turner syndrome (mx) 91.7% 95% 94.7% 96.7% No No Triploidy detection Yes No No No No No Male >99.9% 99.1% 99.4% 99% No No Female >99.9% 97.6% 97.9% 99% No No Sex Chromosome - extra copy 22q 11.2 deletion syndrome / DiGeorge Syndrome 1p36 deletion syndrome / Angelman syndrome / Cridu-chat syndrome / Prader-Willi syndrome How early can the test be used? Yes Yes Yes Yes No No 95.7% No 60-86% No No No 93.8->99% No 60-90% No No No 9 weeks >10 weeks >10 weeks >10 weeks >10 weeks 9+ weeks

4% 99% No No Female >99.9% 97.6% 97.9% 99% No No Sex Chromosome - extra copy 22q 11.

4 SE IL TEST DEL DNA FETALE È POSITIVO. Praticamente tutti i feti Down sono diagnosticati dal test ma c è un 0.1% di falsi positivi VPP (%) Donne positive al Test combinato Donna di 38 Anni a 10 settimane o NT aumentata Donna di 35 Anni a 10 settimane Popolazione generale Donna di 25 anni A 10 settimane 1:20 1:100 1:240 1:700 1:1000 Incidenza di sindrome di Down nella popolazione che ha beneficiato del test

settimane o NT aumentata Donna di 35 Anni a 10 settimane Popolazione generale Donna di 25 anni A 10

6 Risultato chiaro che non Lascia dubbi. Il test è o negativo o positivo Se è nella «fascia grigia» è comunque positivo V va meglio per V va meglio per le Ovodonazioni

9 DNA fetale Eseguito a 13 sett 46,XY (Maschio normale) Eco a 16 settimane: sospetto femmina Eco a 20 settimane : feto femmina La paziente era una ovodonazione che partiva come gemellare.. Molto probabilmente è stato amplificato Il segnale Y del sacco del feto riassorbito

paziente era una ovodonazione che partiva come gemellare.

11 DNA fetale e Demised twin In caso di discordanza di sesso e/o di cariotipo, l errore può riguardare sia un FP che un FN. Dubbi con Verinata (NCV) ma miglior risultato con Natera (SNPs). Più probabile che il demised twin sia aneuploide Non ci sono studi che indicano per quanto tempo il sacco Non ci sono studi che indicano per quanto tempo il sacco riassorbito immetta DNA in circolo ma NON meno di 6-7 settimane.

Più probabile che il demised twin sia aneuploide Non ci sono studi che indicano per quanto tempo il

12 37 anni, NT=3 mm, Test Combinato 1:300 Trisomia 18 Trisomia X Amnio negativa 46,XX

13 Test Combinato positivo per T18 NIPT positivo per T21 negativo per T18 (ff=11.5%) Funicolocentesi : T18 (QF-PCR) T18 allelic ratio= 1:2 ; T21 allelic ratio=1:1 QF-PCR su placenta: T18 allelic ratio=1.3:1 T21 allelic ratio= 1.5:1? Biopsia placentare multipla mosaico T21 > T18

14 DNA fetale e mosaicismo FALSO POSITIVO Mosaicismo confinato alla placenta (1-2% dei CVS ma probabilmente molto di più) Mosaicismo materno (raro) VERO POSITIVO Quanto? Non correlazione fra positività al DNA fetale e clinica FALSO NEGATIVO Errore dovuto al fatto che è necessaria una maggior frazione fetale del 4% minimo per poter rilevare al test (meno cellule contribuiscono). DISCORDANZA DNA VILLOCENTESI CVS eseguito su una zona di placenta non a mosaico Mosaico del mesenchima (Tipo II)??

Non correlazione fra positività al DNA fetale e clinica FALSO NEGATIVO Errore dovuto al fatto che è necessaria una maggior

15 42 years old, gravida 4 parity 1 abortion 2. Combined test 1:5 CVS :46 XX NIPT : positive for T21 Amniocentesis 46 XX with UPD 21 (aborto volontario) NIPT NON HA AIUTATO

16 DNA fetale nelle pazienti trapiantate Patient Information 26 y.o. G1P0, 12w5d Indications for Counseling Personal history of congenital renal abnormalities (Unilateral absent kidney with renal reflux in contralateral kidney) and two prior kidney transplants Family history of Down syndrome in sibling NIPT result: No Aneuploidy Detected with presence of two sex chromosomes (XY) 20 week ultrasound showed normal anatomy and It s a girl! the most recent kidney donor was a male

17 Quando fare il test? La tendenza è quella di fare prima possibile per offrire un CVS entro 90 giorni Accettabile nel caso di diagnosi di T21 Ci sono almeno tre motivi per farlo ragionevolmente più tardi possibile Vanishing Twin FIVET : embrione anche se non impiantato può contribuire?? - Competizione cellulare

giorni Accettabile nel caso di diagnosi di T21 Ci sono almeno tre motivi per

18 COMPETIZIONE CELLULARE All interno di un tessuto in crescita due popolazioni cellulari con differenti proprietà metaboliche SI CONFRONTANO con crescita della popolazione più forte a scapito di quella più debole INFLUISCE SUL CONTRIBUTO DELLE DUE LINEE CELLULARI ALLA COMPOSIZIONE DEL TESSUTO Il potenziale proliferativo di una cellula con anomalia cromosomica, la sua sopravvivenza, il suo destino, il suo contributo allo sviluppo finale di quel tessuto dipendono dalle INTERAZIONE CON LE CELLULE VICINE MEDIATI DALLA p53 1. APOPTOSI 2. INIBIZIONE CICLO DI DIVISIONE CELLULARE (G0) Johnston (2009) Science 324: Bondar e Medzhitov (2010) Cell Stem Cell 2;6(4): Thomson e Compton (2010) J Cell Biol 188,3: Baker (2011) Curr Biol 11;21(1):R11-5

sopravvivenza, il suo destino, il suo contributo allo sviluppo finale di quel tessuto dipendono dalle INTERAZIONE CON LE CELLULE VICINE MEDIATI DALLA p53 1. APOPTOSI 2.

19 COMPETIZIONE CELLULARE APOPTOSI NORMALE PATOLOGICA Thompson e Compton (2010) J Cell Biol 188,3: Mantel e coll. (2011) Blood 109,10:

20 COMPETIZIONE CELLULARE INIBIZIONE CICLO CELLULARE NORMALE PATOLOGICA Thompson e Compton (2010) J Cell Biol 188,3: Mantel e coll. (2011) Blood 109,10:

Compton (2010) J Cell Biol 188,3:369-381

22 E possibile una terapia prenatale della Sindrome di Down??? Studi preliminari su modelli animali Pentilenetetrazolo (PTZ), Memantina - Demenza Fluoxetina (PROZAC) Antidepressivo Ci sono circa 250 geni sul Chr 21 ma solo alcuni sono responsabili della S. di Down. Studi di inattivazione del cromosoma 21 in eccesso. utilizzando lo specifico gene a RNA denominato XIST (da X-inactivation gene), espresso nell'embrione solo dal cromosoma X destinato a essere silenziato. Tale gene induce modificazione del cromosoma a mutarsi nel corpo di Barr, evitando che vi sia un'espressione duplicata di geni situati sui due cromosomi X. Tramite un enzima, XIST è stato introdotto in una coltura di staminali pluripotenti derivate da pazienti Down e si è ottenuto il silenziamento dei geni contenuti nella copia soprannumeraria del cromosoma 21; si è riscontrato un effetto notevole sulla funzionalità delle cellule

24 Brevetto B13788R

25 Brevetto B13788R

27 Conclusioni Numero inaspettato di falsi positivi da mosaicismo Il segnale del feto riassorbito può costituire un problema prima ignorato Spostare il test in avanti?? Conferma che il test va eseguito solo in popolazioni a rischio Conferma della validità del test combinato Nuovo campo : CHD mediante dosaggio di mrna e mirna

28 Grazie per l attenzione

29 Dati su piccole popolazioni incoraggiano l uso del MPS per la diagnosi di: a.microdelezioni; b.duplicazioni; c.traslocazioni (non solo T21); d.mosaicismo T21; con risultati uguali ai microarray e al cariotipo (CVS) Am J Hum Genet Feb 7;92(2):167-76

30 Results Concordant with Karyotype Sample Duplications and Deletions Detected by Deep MPS Affected Chromosome Gain/Loss Size (Mb) Chromosome Region 1 6 Gain 38 6q12-6q Gain 0.3 7q Loss 0.3 7q Loss 6 8p23.2-8p Loss 17 15q q Gain 19 17q q Loss 2 10q Gain 40 3q q29 X Loss 9 Xp22.3-Xp22.31 Deep MPS can provide greater resolution and can detect fetal subchromosomal abnormalities at a resolution of 100kb across the genome

Documenti analoghi

DIAGNOSI PRENATALE DEI DIFETTI CONGENITI

DIAGNOSI PRENATALE DEI DIFETTI CONGENITI DIFETTI CONGENITI Le anomalie congenite sono condizioni che si instaurano tra il momento del concepimento e la nascita. LA DIAGNOSI PRENATALE insieme di tecniche